联合应用负载BMP-2、VEGF和TGF-β的壳聚糖纳米水凝胶缓释系统诱导成骨效果及机制的研究

目录

引言

材料与方法

1.1 实验细胞

1.2 主要试剂

1.3 主要实验仪器

2 缓释系统制备

2.1 负载BMP-2、VEGF或TGF-β壳聚糖纳米微球制备

2.2 负载BMP-2、VEGF或TGF-β壳聚糖纳米微球缓释系统制备

2.3壳聚糖纳米球粒径、载药率和包封率测定

2.4 壳聚糖纳米球及壳聚糖纳米微球水凝胶缓释效率测定

3 细胞培养

4 细胞毒性实验

5 ALP染色及定量分析

6 茜素红染色及定量分析

7 实时荧光定量PCR检测

（2）cDNA合成

（3）PCR扩增

8Western blot法检测

（1）总蛋白提取

（2）制胶

（3）电泳

（4）转膜

（5）抗体孵育及显影

（6）分析结果

9 统计学处理

结果

1.1 壳聚糖纳米微球粒径分析

1.2壳聚糖纳米微球载药率及包封率

1.3壳聚糖纳米微球及壳聚糖纳米微球水凝胶缓释系统体外释放曲线

1.4 细胞毒性实验

2.1 成骨标志物碱性磷酸酶和钙盐沉积表达

2.2 实时荧光定量PCR检测成骨分化相关基因的表达

2.3 Western blot实验检测成骨相关信号通路的表达

3 联合应用负载BMP-2、VEGF和TGF-β的壳聚糖纳米缓释系统诱导成骨效果及机制的研究实验

3.1 成骨标志物ALP和钙盐沉积表达

3.2 实时荧光定量PCR检测成骨分化相关基因的表达

3.3 Western blot实验检测成骨相关信号通路的表达

讨论

1 壳聚糖纳米微球水凝胶缓释系统

2.1 BMP-2、VEGF和TGF-β均具有诱导成骨分化的作用

2.2 联合应用BMP-2和VEGF诱导成骨分化的协同作用

2.3 根据TGF-β双相作用联合应用BMP-2、VEGF和TGF-β诱导成骨分化的作用

2.4 联合应用BMP-2、VEGF和TGF-β诱导成骨分化的机制

3 联合应用负载BMP-2、VEGF和TGF-β的壳聚糖纳米缓释系统诱导成骨效果及机制

3.1 依据时效关系联合应用负载BMP-2、VEGF和TGF-β缓释系统

3.2 联合应用负载BMP-2、VEGF和TGF-β缓释系统促进成骨诱导的主要机制

结论

参考文献

综述: 成骨相关信号通路及生长因子网络调控机制的研究进展

参考文献

攻读学位期间的研究成果

致谢

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