引言
材料与方法
1 所用仪器、试剂和耗材
1.1主要使用仪器
1.2 主要使用试剂和耗材
1.3使用的试剂配制
2选择细胞系
3细胞处理
3.1细胞的复苏
3.2细胞的传代
4 PTGS2基因启动子部分区域甲基化检测
4.1细胞系DNA的提取
4.2 亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)
5 PTGS2基因mRNA检测
5.1 细胞系总RNA的提取
5.2 反转录为cDNA
5.3 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)
5.4 qRT-PCR结果数据分析
6 胃癌细胞系中相关蛋白表达的检测
6.1 蛋白提取
6.2 Western blotting 测蛋白表达
7 microRNA的qRT-PCR检测
8细胞免疫荧光检测
9 LMP1和LMP2A过表达细胞模型建立
9.1 质粒的预备
9.2 重组质粒转染胃癌细胞系SGC7901
10 siRNA转染
11统计学分析
结果
1 Real-time PCR 检测胃癌细胞系中COX-2 的转录表达
2 Western blotting检测胃癌细胞系中COX-2蛋白表达
3 COX-2编码基因启动子区域甲基化状态检测
4 COX-2相关3种microRNA的检测结果
5 COX-2蛋白在胃癌细胞系中的亚细胞定位检测
6外源性EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A稳定表达对COX-2的影响
6.1 外源性LMP1和LMP2A稳定表达SGC7901细胞的筛选和建立
6.2 外源性LMP1和LMP2A稳定过表达对COX-2的影响
7 外源性LMP1或LMP2A瞬时表达对COX-2的影响
7.1建立外源性LMP1和LMP2A瞬时过表达的SGC7901细胞
7.2 外源性LMP1和LMP2A瞬时表达对COX-2的影响
8 干扰LMP1和LMP2A的表达对COX-2的影响
9 Western blotting检测TRAF2在胃癌细胞系中的表达
10外源性LMP1和LMP2A表达对TRAF2的影响
10.1 外源性LMP1和LMP2A稳定表达对TRAF2的影响
10.2 外源性LMP1和LMP2A瞬时表达对TRAF2的影响
11 干扰LMP1和LMP2A表达对TRAF2的影响
12 靶向干扰TRAF2对COX-2表达的影响
13 Western blotting检测ERK信号分子在胃癌细胞系中的表达
14 过表达LMP1后对p-ERK的影响
15 阻断ERK通路对COX-2的影响
15.1MEK抑制剂PD0325901阻断ERK通路
15.2 小干扰序列阻断ERK通路
16 阻断AKT通路对COX-2表达的影响
16.1 LY294002阻断PI3K/AKT通路
16.2干扰FoxO1对COX-2的影响
讨论
结论
参考文献
综述:COX-2在胃癌发生发展中的作用及调控机制
综述参考文献
攻读学位期间的学术成果
缩略词表
致谢
声明
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