引言
材料与方法
1.1仪器、试剂和耗材
1.1.1 主要仪器
1.1.2 主要试剂和耗材
1.1.3 常用试剂配制
1.2 细胞系的选择
1.3 细胞处理
1.3.1 实验前准备
1.3.2细胞复苏
1.3.3培养液的更换
1.3.4细胞传代
1.4 Smad2及miR-155-5p mRNA 检测
1.4.1细胞系RNA提取
1.4.2 cDNA合成
1.4.3 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)
1.4.4 microRNA逆转录
1.4.5 miRNAs表达水平的检测
1.4.6 Real-time qPCR结果数据分析
1.5 Smad2及相关蛋白检测
1.5.1 细胞系总蛋白的提取及浓度测量
1.5.2 Western blotting 检测相关蛋白的表达
1.5.3通路抑制剂作用后检测蛋白表达变化
1.6 免疫荧光检测胃癌细胞中蛋白亚定位
1.7 细胞生物学表型的检测
1.7.3细胞周期检测
1.8 统计学和图像分析
结果
2.1 EBV阳性胃癌细胞系中miR-155的转录表达
2.2 EBV阳性胃癌细胞系中miR-155-5p的生物学功能分析
2.2.1 EBV阳性胃癌细胞系中miR-155-5p靶基因的KEGG pathway分析
2.2.2 miR-155-5p对细胞增殖的影响
2.2.3 miR-155-5p对细胞周期的影响
2.2.4 miR-155-5p对细胞凋亡的作用
2.3. EBV阳性胃癌细胞系中miR-155-5p 对Smad2表达的调控
2.3.1 EBV阳性胃癌细胞系中Smad2蛋白的表达及亚细胞定位
2.3.3 EBV阳性胃癌细胞系中miR-155-5p调控Smad2的表达
2.3.2 EBV阳性胃癌细胞系中Smad2基因的转录表达
2.4外源性LMP2A表达对miR-155-5p和Smad2表达的影响
2.4.1 稳定表达和瞬时表达LMP2A细胞克隆的构建及鉴定
2.4.2 外源性LMP2A表达对miR-155-5p和Smad2表达的影响
2.4.3 外源性LMP2A表达对p-Smad2细胞定位的影响
2.5 抑制NF-κB通路对miR-155-5p和Smad2表达的影响
2.5.1 抑制NF-κB通路对miR-155-5p转录水平的影响
2.5.3 抑制NF-κB通路对通路相关蛋白表达的影响
2.5.2 抑制NF-κB通路对Smad2转录和蛋白水平的影响
2.6.1 PI3K/AKT通路抑制剂处理后蛋白表达变化
2.6 PI3K/AKT，mTOR通路以及泛素化对Smad2相关蛋白表达的影响
2.6.2. mTOR通路抑制剂处理后蛋白表达变化
2.7 Smad2对肿瘤细胞生物学行为的影响
2.6.2 蛋白酶体抑制剂处理后蛋白表达变化
讨论
1.EBV相关胃癌中miRNAs的转录表达及调控
2. EBV相关胃癌中AKT/PI3K的表达及调控
3.Smad2在EBV相关胃癌发展中的作用
4.EBV相关胃癌中泛素化对Smad2表达的调控
结论
参考文献
综述:Smad2基因与肿瘤和病毒感染相关性研究进展
参 考 文 献
攻读学位期间的研究成果
附录或缩略词表
致谢
声明
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