引言
材料与方法
1实验材料
2实验仪器
3鸡蛋孵化过程
4鸡蛋气室注射
5慢病毒转染
6 BMP2沉默效果的确认
6.1蛋白质免疫印迹（Western Blotting，WB）
6.2 qRT-PCR实验步骤
7 孵化幼鸡心率测定实验
8心脏包埋、切片、HE染色及右心室壁厚度测量
8.1组织的采集、固定和保存
8.2组织的包埋、切片、展片及保存
8.3切片
8.4 HE染色
9孵化幼鸡心脏BMP2的免疫组织化学研究
9.1脱蜡、修复
9.2画圈
9.3过氧化氢孵育
9.4山羊血清封闭
9.5一抗孵育
9.6二抗孵育
9.7辣根酶标记
9.8 DAB显色
9.9复染
9.10梯度脱水
9.11封片
10心肌细胞培养具体步骤
11心肌细胞免疫组化鉴定
12细胞增殖与活性检测实验
13心肌细胞内钙离子浓度测定
14原代心肌细胞形态学评价
14.1心肌细胞长度测定
14.2心肌细胞表面积测量
15蛋白质免疫印迹实验
16统计学分析
结果
1孵化幼鸡的一般资料
2慢病毒介导的BMP2沉默效果的确认
3 BMP2在孵化幼鸡心脏组织中的分布
4 BMP2沉默对孵化幼鸡心脏形态的影响
4.1孵化幼鸡右心室壁厚度测量结果
4.2孵化幼鸡心脏右心室壁厚度的分析结果
5孵化幼鸡心率测定结果
6 PFOA暴露对心脏组织BMP2、pSMAD1和PPARα蛋白表达的影响
7 BMP2与PPARα靶点的相互作用
8原代心肌细胞细胞型鉴定
9 PPARα慢病毒沉默效果的确证
10细胞增殖实验结果
11心肌细胞形态学改变
12心肌细胞内钙离子浓度测定结果
13 PFOA预处理对Wnt5a/Frizzled2蛋白表达水平的影响
14 PFOA直接暴露对Wnt5a/Frizzled2蛋白表达水平的影响
讨论
1. PFOA暴露对鸡胚心脏发育毒性的体内研究
2. PFOA暴露对鸡胚心脏发育毒性的体外研究
结论
参考文献
综述:各类环境污染物对心脏发育的影响
综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢
声明
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