声明
第一章 绪 论
1.1 果胶
1.1.1 果胶的结构
1.1.2 果胶的应用
1.2 果胶酶
1.2.1 果胶酶的概述
1.2.2 果胶酶的来源
1.2.3 果胶酶的应用
1.3 果胶裂解酶
1.3.1 果胶裂解酶的概述
1.3.2 果胶裂解酶的来源
1.3.3 果胶裂解酶的纯化
1.3.4 果胶裂解酶的应用
1.4 蛋白组学
1.4.1 蛋白组学的概述
1.4.2 蛋白组学的应用
1.5 固定化酶
1.5.1 固定化酶的概述
1.5.2 壳聚糖固定化酶
1.5.3 果胶酶固定化研究进展
1.6 研究目标及研究内容
1.6.1 研究目标
1.6.2 研究内容
第二章 多粘类芽孢杆菌KF-1中果胶裂解酶的发掘及PL10果胶裂解酶的异源表达
2.1 实验材料
2.1.1 菌种及培养基
2.1.2 试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 LC-MS/MS发掘P. polymyxa KF-1中的果胶裂解酶
2.2.1 P. polymyxa KF-1的培养
2.2.2 P. polymyxa KF-1中果胶裂解酶的分离纯化
2.2.3 从P. polymyxa KF-1分离的果胶裂解酶的LC-MS/MS分析
2.2.4 PL10果胶裂解酶序列分析
2.3 PL10果胶裂解酶的克隆、表达与纯化
2.3.1 PL10果胶裂解酶的克隆
2.3.2 目的蛋白的诱导与表达
2.3.3 目的蛋白的纯化
2.3.4 重组目的蛋白的检测
2.4 结果与讨论
2.4.1 P. polymyxa KF-1的培养
2.4.2 P. polymyxa中果胶裂解酶的分离纯化
2.4.3 果胶裂解酶级分LC-MS/MS分析
2.4.5 PL10果胶裂解酶序列分析
2.4.6 PL10果胶裂解酶的克隆
2.4.7 目的蛋白的表达及纯化
2.5 本章小结
第三章 PL10果胶裂解酶PpPel10a的功能研究
3.1 实验材料和仪器
3.1.1 重组酶和底物
3.1.2 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 重组PpPel10a的性质研究
3.2.2 PpPel10a降解橘皮果胶产物分析
3.2.3 PpPel10a的应用研究
3.3 实验结果与讨论
3.3.1 重组PpPel10a的性质研究
3.3.2 PpPel10a降解橘皮果胶的产物分析
3.3.3 PpPel10a的应用研究
3.4 本章小结
第四章 重组PpPel10a的固定化
4.1 实验材料和仪器
4.1.1 酶液和底物
4.1.2 试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 壳聚糖微球载体的制备
4.2.2 壳聚糖微球载体固定化酶
4.2.3 固定化酶活力的测定
4.2.4 固定化条件的单因素优化
4.2.5 响应面分析
4.2.6 固定化酶与游离酶的酶学性质对比
4.2.7 储存稳定性的比较
4.2.8 重复使用次数测定
4.2.9 固定化PpPel10a微球的SEM观察
4.2.10 固定化酶的FTIR表征
4.3 实验结果与讨论
4.3.1 固定化单因素的优化
4.3.2 响应面分析
4.3.3 最优条件验证实验
4.3.4 固定化酶和游离酶的性质比较
4.3.5 储存稳定性的比较
4.3.6 重复使用次数测定
4.3.7 固定化PpPel10a微球的SEM观察
4.3.8 固定化酶的FTIR表征
4.4 本章小结
第五章 结论和展望
参考文献
致谢
附 录
济南大学;
