DEHP对小鼠精原细胞Bax和Bcl-2表达水平的影响

摘要

目的：DEHP是一种广为存在的环境污染物，在全世界范围被用作许多制剂的增塑剂和溶剂。本实验通过检测不同浓度DEHP暴露对小鼠精原细胞Bax和Bcl-2表达水平的影响，进一步探讨DEHP所致精原细胞的增殖、凋亡作用及其雄性生殖毒性的作用机制。　　方法：将小鼠精原细胞分别暴露于浓度为0mg·L-1（对照组）、10mg·L-1（低剂量组）、100mg·L-1（中剂量组）、1000mg·L-1（高剂量组）DEHP的完全培养基中培养24h和48h，采用MTT法检测细胞相对活力，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况及Western blot技术检测Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。　　结果：⑴在检测细胞相对活力时，DEHP暴露24h后，1000mg·L-1剂量组明显低于其它各剂量组，100mg·L-1剂量组低于对照组和10mg·L-1剂量组（P＜0.05）；DEHP暴露48h后，各剂量组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），并呈现剂量反应关系。⑵在检测细胞凋亡时，随着染毒剂量的增加，小鼠精原细胞的早期和晚期凋亡率呈逐渐上升趋势，总凋亡率明显升高（P＜0.05）。DEHP染毒24h后，早期凋亡率1000mg·L-1剂量组高于对照组（P＜0.05）；晚期凋亡率1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组（P＜0.05）；总凋亡率呈现明显上升趋势，其中1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组还明显高于10mg·L-1剂量组（P＜0.05）。DEHP染毒48h后，早期凋亡率各剂量组均明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组高于100mg·L-1和10mg·L-1剂量组（P＜0.05）；晚期凋亡率1000mg·L-1剂量组均高于其他各组（P＜0.05）；总凋亡率各剂量组均明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组高于100mg·L-1和10mg·L-1剂量组（P＜0.05）。⑶实时荧光定量PCR检测中，DEHP染毒24h后，Bax mRNA表达水平1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组与10mg·L-1剂量组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；Bcl-2 mRNA表达水平1000mg·L-1剂量组低于10mg·L-1剂量组和对照组（P＜0.05）；此外，Bax和Bcl-2 mRNA比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均明显高于对照组，1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组（P＜0.05）。DEHP染毒48h后，Bax mRNA表达水平1000mg·L-1剂量组明显高于其他各组，100mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组和对照组（P＜0.05）；Bcl-2 mRNA表达水平各剂量组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），并呈现下降趋势；Bax和Bcl-2 mRNA比值1000mg·L-1剂量组明显高于10mg·L-1剂量组和对照组（P＜0.05）。⑷Western blot显示，DEHP染毒24h后，Bax蛋白表达水平1000mg·L-1剂量组高于对照组（P＜0.05）；Bcl-2蛋白表达水平各剂量组与对照组比较差异均具有统计学意义，且1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显低于10mg·L-1剂量组和对照组（P＜0.05）；此外，Bax/Bcl-2两蛋白比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组，而1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组（P＜0.05）。DEHP染毒48h后，Bax蛋白表达水平各剂量组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）；Bcl-2蛋白表达水平1000mg·L-1剂量组明显低于对照组和10mg·L-1剂量组（P＜0.05）；Bax/Bcl-2两蛋白比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均高于对照组（P＜0.05）。　　结论：DEHP可诱导小鼠精原细胞相对活力下降，通过抑制Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达及促进Bax mRNA和Bax蛋白表达实现诱导精原细胞凋亡。

目录

声明

前言

1 实验材料

1.1实验细胞

1.2 主要实验仪器

1.3 主要实验试剂

1.4 主要溶液配制

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 MTT法检测细胞相对活力

2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率

2.4 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）检测细胞基因表达

2.5 蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达水平

2.6 统计处理

3 结果

3.1 不同浓度的DEHP对小鼠精原细胞相对活力的影响

3.2 DEHP对小鼠精原细胞的凋亡作用

3.3 DEHP对小鼠精原细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响

3.4 DEHP对小鼠精原细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响

4 讨论

5 结论

结语

参考文献

文献综述:DEHP对雄性生殖系统毒性的研究进展

中英文略缩表

攻读学位期间发表文章情况

个 人 简 历

致谢