131I核素标记B7-H3单抗靶向治疗肾透明细胞癌实验研究

摘要

肾癌(renal cell carcinoma，RCC)是泌尿系统常见肿瘤，其最常见的病理类型为肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)，其所占肾癌比例超过80％。肾根治性切除手术是早期肾癌的主要治疗方式，而肾癌术后及转移性肾癌缺乏有效的治疗手段。针对肿瘤新生血管的靶向治疗被认为是最有可能成为晚期肾癌的有效治疗手段，并且针对肿瘤血管开展靶向治疗已成为肿瘤生物治疗的热点，其药物从作用机制上主要分为两类:抗血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体(VEGFR)和抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)途径。目前靶向治疗的临床治疗效果并不显著，加上其独特的不良反应，限制了其在临床的进一步应用。B7-H3在肿瘤的进展尤其是在肿瘤新生血管生成方面是近年来研究的热点，B7-H3可作为肿瘤相关性抗原发挥重要作用，是肿瘤靶向治疗的一个潜在靶点。　　本研究首先从临床收集肾透明细胞癌病例，检测B7-H3在肾癌中的表达，结合临床资料，观察B7-H3在肾癌的价值及临床意义。然后我们采用核素131I进行B7-H3鼠抗人单克隆抗体4H7标记，131I-4H7的标记率，放化纯达到实验要求，且在肾癌荷瘤鼠移植瘤内具有较高的摄取率和较长的滞留时间，具有良好的靶向性，进而利用131I-4H7对荷肾癌移植瘤裸鼠进行治疗，观察131I-4H7对肾癌的治疗效果，并初步探讨其可能存在的机制及应用价值。　　本研究分三个部分:　　第一部分：B7-H3在肾透明细胞癌中的表达及临床意义　　目的:探讨B7-H3在肾透明细胞癌患者血清水平及其临床意义，及B7-H3在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义。　　方法:收集临床上确诊为肾透明细胞癌病例资料126例，对其临床资料进行分析，并留取患者术前血清，及术后肾肿瘤组织标本。运用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)法检测肾透明细胞癌患者及健康体检者对照组血清可溶性B7-H3，结合患者临床资料评估其对肾透明细胞癌患者的临床意义。运用免疫组织化学方法（immunohistochemistry，IHC）检测肾透明细胞癌组织中B7-H3的表达，尤其是在血管上皮的表达，结合患者临床资料，观察B7-H3表达阳性的临床意义。　　结果:肾透明细胞癌患者血清中存在可溶性B7-H3，与健康体检者相比，其水平显著增高。肾透明细胞癌患者游离B7-H3高水平与肾癌临床分期、淋巴结有无转移及远处脏器有无转移有关。B7-H3在肾透明细胞癌组织中阳性表达高于在正常肾脏组织中的表达。126例肾透明细胞癌标本中，有102例(80.95％)肾透明细胞癌患者肿瘤组织血管中可见B7-H3阳性表达。　　结论:肾透明细胞患者血清可溶性B7-H3水平显著上调，与疾病进展相关。肾透明细胞癌组织中高表达B7-H3，尤其是在肿瘤血管中呈阳性表达，提示B7-H3可能在肿瘤血管生成方面发挥重要作用。　　第二部分：B7-H3单克隆抗体4H7的131I标记及体内生物分布研究　　目的:研究鼠抗人B7-H3单克隆抗体4H7的131I标记方法，观察标记抗体药代动力学特点及其在肾透明细胞癌皮下移植瘤模型中生物学分布与显像研究。　　方法:采用氯胺T法进行标记，测定131I-4H7标记率、放化纯和稳定性。对131I-4H7体内分布及药物代谢动力学进行研究。观察131I-4H7在荷肾透明细胞癌（786-0细胞）裸鼠皮下移植瘤模型中的生物学分布，并进行显像研究。　　结果:131I-4H7标记率为61.64％，放化纯为98.4％。131I-4H7在ICR小鼠体内代谢过程符合一级血药动力学二室模型，t1/2α为27.94min，t1/2β为1634.74min，在体内主要通过肝和肾代谢。131I-4H7在荷瘤小鼠实验研究中显示131I-4H7在肿瘤组织中停留时间较长，且皮下移植瘤摄取率较高，在24h达最高，为3.32％ID/g。荷瘤鼠体内γ显像研究显示，131I-4H7组在各个时间点放射浓聚高于Na131I组。　　结论:131I-4H7易于制备，放化纯度高，标记物的稳定性好，达到实验要求。131I-4H7在肾癌荷瘤鼠中具有较高的摄取率和较长的滞留时间，具有良好的靶向性，对肾癌放免显像和治疗有潜在的应用前景。　　第三部分：131I标记B7-H3单克隆抗体在肾透明细胞癌裸鼠移植瘤治疗实验研究　　目的:观察131I-4H7在肾透明细胞癌裸鼠移植瘤中的治疗作用，并探讨其可能存在的机制及应用价值。　　方法:在荷肾透明细胞癌786-0细胞裸鼠移植瘤直径达8mm时，将裸鼠模型分为131I-4H7组、131I-mIgG组、131I组及生理盐水组，各组分别注射250μCi/100μl的131I-4H7、131I-mIgG、Na131I或等体积生理盐水，通过肿瘤的生长曲线进行传统药效学分析，及在第0、7、14、21天分别注射18氟-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽(18F-RGD)，行小动物正电子发射计算机断层显像(positron emissiontomography-computed tomography，PET-CT)实时监测肿瘤体积变化及观察移植瘤内组织放射性摄取率变化。　　结果:131I-4H7组肿瘤生长明显缓慢，治疗21天后，肿瘤体积明显小于131I及生理盐水注射组，抑瘤率达48.81％，差异具有统计学意义(P＜0.001)。131I-mIgG组在21天时的抑瘤率为22.41％，131I-4H7抑瘤效果优于131I-mIgG组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。小动物PET-CT检查提示，在第7天、14天及21天，131I-4H7组肿瘤组织的18F-RGD摄取率明显降低，与生理盐水组、131I组及131I-mIgG组相比差异具有统计学意义(P＜0.001)。　　结论:131I-4H7组移植瘤生长缓慢，与131I-mIgG、131I及生理盐水组差异具有统计学意义。131I-4H7在较早的时间即显示出其抑制肿瘤新生血管生成的效果，可能作为一个新的肾癌靶向治疗药物。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 B7-H3在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分 B7-H3单克隆抗体4H7的131I标记及体内生物分布研究

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分 131I标记B7-H3单克隆抗体在肾透明细胞癌裸鼠移植瘤治疗实验研究

结果

讨论

结论

参考文献

综述 晚期肾透明细胞癌免疫治疗进展

攻读博士学位期间发表文章

英文缩略语词表

致谢