基于红色荧光蛋白二聚体的N--糖酰胺酶活性检测方法研究

目录

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摘要

缩略语

第一章文献综述

1．1糖基化重要性

1．2 PNGase酶简介

2红色荧光蛋白异源二聚体的研究概况

2．1红色荧光蛋白异源二聚体简介

2．2红色荧光蛋白二聚体的发展机理

2．3红色荧光蛋白二聚体的应用

3定点突变简介

4巴斯德毕赤酵母表达系统简介

4．1毕赤酵母中用于高效表达外源蛋白基因的启动子

4．2毕赤酵母经典分泌途径

5本研究的目的意义及内容

第二章ddRFPA1、ddRFPB1糖基化突变体的获得及在原核表达系统中的共表达

1实验材料

1．1试剂

1．2仪器设备

2实验方法

2．1 ddRFPA1、ddRFPB1的定点突变步骤

2．2 ddRFPA1和ddRFPB1突变体的转化和共表达

2．3荧光酶标仪测定ddRFPA1、ddRFB1的荧光强度

3实验结果

3．1定点突变结果

3．2 ddRFPA1和ddRFPB1及其突变体的转化和共表达结果

3．3 ddRFPA1、ddRFB1荧光强度测定结果

4讨论

5本章小结

第三章ddRFPA1、ddRFPB1及突变体的真核亚克隆与酵母表达

1材料

1．1菌种与质粒

1．2材料和试剂的准备

2实验方法

2．1目的基因的常规分子克隆

2．2重组质粒转化到酵母细胞并表达

3结果与分析

3．1基因克隆扩增结果

3．2酵母转化结果

3．3酵母表达结果

4讨论

5小结

第四章红色荧光二聚体在PNGase酶活性检测中的应用

1实验材料

1．1原料

1．2主要仪器设备

2实验方法

2．1 PNGase酶的表达纯化

2．2 ddRFPA1、ddRFB1及其突变体荧光强度的测定

3结果与分析

3．1 ddRFPA1／ddRFP196B、ddRFP139A/ddRFP196B突变二聚体5天内荧光值的变化

3．2 PNGase对ddRFPA1／ddRFP196B突变二聚体荧光强度的影响

3．3突变二聚体在PNGase酶解前后荧光强度的变化

4讨论

5本章小结

全文结论

论文创新点

参考文献

致谢