家蚕核rDNA的克隆及其分子系统发育分析

摘要

本研究以家蚕为材料，使用SES、SDS、KI、CTAB法提取家蚕的基因组DNA，紫外和琼脂糖凝胶电泳表明：SES法提取家蚕丝腺DNA简便、快捷，提取的DNA质量较高。以其他昆虫的rDNA的保守序列为参考设计了多对特异引物，分段克隆并测序家蚕rDNA的全序列和柞蚕18S rDNA。测序结果拼接后表明家蚕18S rDNA为1907 bp、ITS1为762 bp、 5.8S为167 bp、 ITS2为878 bp、28S rDNA则长达3981 bp，家蚕rDNA总长度为7695 bp。将家蚕18S rDNA、柞蚕18SrDNA与从GenBank中检索出的14个目18种昆虫的18S rDNA用Clustal1.83软件进行多序列比对，表明昆虫的18S rDNA有四段相对保守序列，在同源区各物种昆虫之间碱基差别不是很大，变异主要由转换和巅换引起，而在多变区则主要由插入、缺失引起。

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文摘

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第一章绪论

1.系统发育学研究简介

2.昆虫分子系统发育的研究技术

2.1蛋白质的分子系统学方法

2.2 DNA分子标记

3.用于昆虫分子系统学研究的标记分子

4.系统发生树的构建方法

5.昆虫分子系统发育研究概况

6.家蚕的分子系统学研究进展

7.本研究的意义

第二章家蚕、柞蚕18S rDNA的克隆及分子系统发育分析

1.材料与方法

1.1 DNA提取的材料

1.2主要仪器设备

1.3溶液的配制

1.4家蚕基因组提取方法

1.5 DNA检测

1.6 18S rDNA特异引物的设计

1.7 18S rDNA目的片段的扩增

1.8DNA序列分析

1.9相关18S rDNA基因的获得与比对

1.10数据分析与分子系统发育树的构建与检验

2结果与分析

2.1.基因组的提取方法

2.2 PCR的产物的电泳检测

2.3家蚕、柞蚕18S rDNA的序列分析

2.4与其它昆虫18S rDNA的同源区和多变区的比较

2.5系统发育关系分析

3.讨论

3.1 18S rDNA序列

3.2建树方法的比较

3.3 18S rDNA序列在昆虫纲系统发育中的应用

第三章家蚕核rDNA基因ITS和28S rDNA的克隆与序列分析

1.材料与方法

1.1材料

1.2方法

1.3 ITS、28S rDNA目的片段特异引物的设计

1.4 PCR产物的序列测定

1.5其他ITS1和ITS2序列来源

1.6序列分析与分子系统树的构建

2.结果与分析

2.1.PCR的产物的电泳检测

2.2家蚕ITS、5.8S、28S rDNA的序列分析

3.讨论

结论

参考文献

附录A：溶液的配制

致谢

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