Bt基因的组织特异性表达及转基因水稻分子检测方法的研究

摘要

自转基因作物问世以来，转基因产品的安全性问题一直是人们关注的焦点。水稻作为最重要的一种粮食作物之一，其转基因工作早在上个世纪90年代就开始了，但其商业化进程却相对迟缓，这主要缘于其潜在食用安全性问题未能得到有效的解决。为此，本文拟从转Bt基因水稻组织特异性表达技术和转基因水稻检测技术两方面入手进行初步研究，以期为转基因水稻食用风险的降低和商业化进程的推进做些有益探索。论文工作取得的主要的研究结果如下： 1.借助生物信息学手段，参照拟南芥基因序列，筛选到六个水稻组织特异性表达启动子，经过RT-PCR组织谱筛选后得到两个可用组织特异性表达启动子TspⅠ和TspⅡ，并对其序列和调控元件进行了初步分析。然后将克隆到的TspⅡ和35S启动子，插入到植物表达载体pYP-TspⅠ-GFP中，替换掉先期构建的TspⅠ启动子，调控GFP基因的表达，以便转化水稻后监测启动子的组织表达情况。 2.以“克螟稻”为材料，利用PCR技术克隆到Bt全长基因，并将其构建到pYP-TspⅠ-GFP载体中替换了GFP基因，得到组织特异性植物表达载体pYP-TspⅠ-Bt。 3.利用基因枪法，将构建的pYP-TspⅠ-GFP和pYP-TspⅠ-Bt表达载体导入“皖粳97”水稻材料中，经PPT筛选得到了分化的抗性愈伤组织。 4.针对转基因水稻中常用的转基因元件，优化并建立了转基因水稻的定性PCR检测体系。研究结果表明，建立的PCR定性检测体系能够很好地从转基因水稻中检测出这些转基因材料特有的转基因元件。 5.在定性检测的基础上，分别尝试用SYBRGreenⅠ染料法和TaqMan探针法对转基因水稻进行了荧光定量PCR检测，对检测的技术体系进行了初步探索，并成功地对自配已知浓度的转基因水稻进行了定量检测，检测值与实际设定值也较为接近。

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文摘

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1文献综述

引言

2Bt抗虫水稻组织特异性表达载体的构建

3转基因水稻检测技术的研究

4结论

参考文献

附录

致谢

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