伤寒沙门菌sRNA S305在生物膜形成中的作用及机制研究

目录

声明

1 绪 论

1.1 伤寒沙门菌概述

1.2 细菌运动性

1.2.1 鞭毛合成

1.2.2 鞭毛的级联调控

1.3 细菌生物膜

1.3.1 生物膜的成分及形成过程

1.3.2 沙门氏菌生物膜的形成与调控

1.4 细菌sRNA

1.4.1 细菌sRNA的分类及来源

1.4.2 细菌sRNA的作用机制

1.4.3 参与鞭毛和生物膜形成调控的sRNA

1.5 本课题的由来和意义

2 研究目的、研究内容和实验方案

2.1 研究目的

2.2 研究内容

2.2.1 分子特征鉴定

2.2.2 表达特性分析

2.2.3 功能分析

2.2.4 作用机制研究

2.3 实验方案

3 实验材料与实验方法

3.1 实验材料

3.1.1 菌株及质粒

3.1.2 主要试剂和材料

3.1.3 主要溶液及配方

3.1.4 主要仪器及设备

3.2 实验方法

3.2.1 细菌培养

3.2.2 菌株构建

3.2.3 细菌RNA提取

3.2.4 Northern blot

3.2.5 5' RACE

3.2.6 3' RACE

3.2.7 qRT-PCR

3.2.8 生物膜结晶紫染色

3.2.9 泳动试验

3.2.10 生长曲线绘制

3.2.11 mRNA 半衰期检测

3.2.12 靶基因预测及验证

3.2.13 统计学分析

4 实验结果

4.1 S305分子鉴定

4.1.1 Northern blot鉴定S305存在

4.1.2 5'/3' RACE鉴定S305全长

4.1.3 S305基因位置与结构

4.2 表达特征分析

4.3 S305高表达菌株构建

4.3.1 高表达片段扩增

4.3.2 重组质粒构建

4.3.3 高表达菌株WT-pS305和空质粒对照株WT-pBAD的构建

4.4 表型分析

4.4.1 生物膜形成实验

4.4.2 泳动实验

4.4.3 生长曲线绘制

4.5 作用机制

4.5.1 S305高表达对鞭毛相关基因的mRNA水平的影响

4.5.2 S305高表达对生物膜基质相关基因的mRNA水平的影响

4.5.3 csgD及fljB mRNA的半衰期测定

4.5.4 S305与靶标作用区域的研究

4.5.5 其它靶标预测及验证

5 讨论

6 主要结论和展望

参考文献

致谢

在校期间发表的学术论文及其他科研成果

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