四季秋海棠内参基因的筛选和低温、高光下BsMYB62的表达及蛋白互作分析

目录

声明

致谢

摘要

1文献综述

1．1内参基因

1．1．1内参基因研究进展

1．1．2内参基因筛选方法

1．2 MYB转录因子与非生物胁迫

1．2．1 MYB转录因子

1．2．2 MYB转录因子在非生物胁迫中的作用

1．3酵母双杂交技术

1．3．1酵母双杂交技术的原理

1．3．2酵母双杂交技术的应用

1．4四季秋海棠概述

1．5本研究的目的和意义

2引言

3四季秋海棠内参基因的筛选

3．1试验材料

3．1．1植物材料及处理

3．1．2主要试验试剂

3．2．1候选内参筛选和引物设计

3．2．2总RNA提取和质量检测

3．2．3反转录合成cDNA第一链

3．2．4引物特异性验证

3．2．5实时荧光定量PCR

3．2．6内参基因稳定性验证

3．2．7数据处理

3．3结果与分析

3．3．1内参基因引物的特异性分析

3．3．2非生物胁迫组内参基因的筛选

3．3．3生物胁迫组内参基因的筛选

3．3．4低温不同时段胁迫组内参基因的筛选

3．4讨论

4四季秋海棠BsMYB62的克隆表达分析

4．1试验材料及处理

4．1．1植物材料处理

4．1．2质粒与菌株

4．1．3试验试剂和药品

4．1．4主要溶液和培养基配制

4．1．5引物序列

4．2试验方法

4．2．1 BsMYB62转录因子CDS区的克隆

4．2．2 BsMYB62转录因子的生物信息学分析

4．2．3低温和高光胁迫不同时间BsMYB62的实时荧光定量PCR

4．3结果与分析

4．3．1四季秋海棠BsMYB62转录因子CDS区的克隆

4．3．2四季秋海棠BsMYB62基因的生物信息学分析

4．3．3低温和高光胁迫不同时间BsMYB62的表达分析

4．4讨论

5四季秋海棠BsMYB62互作蛋白的筛选

5．1试验材料

5．1．1植物材料处理

5．1．2质粒与菌株

5．1．3试验试剂和药品

5．1．4主要溶液及培养基的配制

5．1．5引物序列

5．2试验方法

5．2．1叶片cDNA文库的构建

5．2．2诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的构建

5．2．3诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性和自激活检测

5．2．4文库筛选试验及阳性克隆的鉴定

5．3结果与分析

5．3．1 mRNA的分离纯化和dscDNA的合成

5．3．2文库鉴定

5．3．3诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的构建

5．3．4诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性和自激活检测

5．4讨论

6结论与展望

6．1结论

6．2展望

参考文献

附表