脯氨酰羟化酶3在胃癌中的表达及对胃癌细胞克隆形成和迁移能力的影响

摘要

目的：　　探讨脯氨酰羟化酶3（Prolyl hydroxylase-3，PHD3）在胃癌组织中的表达情况、对胃癌细胞克隆形成及迁移能力的影响、以及可能的分子作用机制。　　方法：　　运用免疫组织化学染色及Western-blot初步探讨PHD3在60例胃癌组织样本中的表达情况及与病理特征之间的关系。运用细胞转染及RNA干扰（RNA Interference，RNAi）的方法获得PHD3过表达和沉默的AGS、BGC823胃癌细胞株。在PHD3过表达和沉默的细胞株中，通过软琼脂克隆形成实验和迁移实验检测细胞克隆形成和迁移能力的变化。运用免疫荧光、免疫共沉淀及Western-blot检测PHD3和蓬散蛋白2（Dishevelled-2，DVL2）在AGS和BGC823细胞株中的相互作用，以及PHD3对Wnt/β-catenin/TCF信号通路下游靶基因Cyclin D1、c-Myc及Twist的影响。　　结果：　　相比于癌旁组织，PHD3在胃癌组织中表达下降（P＜0.01）。PHD3表达水平的高低与肿瘤大小有关，肿瘤越大，PHD3的表达水平越低（P＜0.05），PHD3的表达水平在肿瘤分期的构成比上存在差异（P＜0.05），经Wilcoxon秩和检验后显示，肿瘤分期越晚，PHD3的表达水平越低（P＜0.01）。在性别、年龄、肿瘤生长部位、肿瘤病理类型方面，PHD3表达水平的差异无明显统计学意义（P＞0.05）。转入PHD3过表达载体后，经Western-blot证实AGS和BGC823细胞株中PHD3表达水平升高；转入PHD3 shRNA慢病毒载体后，经Western-blot证实AGS和BGC823细胞株中PHD3表达水平下降。过表达PHD3的AGS、BGC823细胞株，其克隆形成及迁移能力明显降低（P＜0.01）；沉默PHD3的AGS、BGC823细胞株，其克隆形成及迁移能力明显增强（P＜0.01）。过表达PHD3可下调转染细胞株中Cyclin D1、c-Myc及Twist的表达，沉默PHD3可上调Cyclin D1、c-Myc及Twist的表达。PHD3与DVL2在胃癌细胞中存在相互作用。　　结论：　　PHD3可能是一个抑癌基因，在胃癌中低表达。PHD3可与DVL2相互作用而抑制Wnt/β-catenin/TCF信号通路，继而抑制胃癌的增殖、侵袭和转移，这可能是治疗胃癌的一个新的靶点。

目录

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引言

第一章 PHD3在胃癌组织样本中的表达

1.1 实验材料与方法

1.2 结果

1.3 讨论

第二章 PHD3过表达及沉默细胞株的构建

2.1实验材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

第三章 PHD3对胃癌细胞克隆形成和迁移能力的影响

3.1 实验材料与方法

3.2 结果

3.3 讨论

第四章 PHD3通过DVL2调节Wnt/β-catenin/TCF信号通路

4.1 实验材料与方法

4.2 结果

4.3 讨论

第六章 结论

参考文献

综述: 胃癌预防的研究进展

硕士攻读期间发表的文章

致谢