阳离子纳米载体PGEA-CHO运载Brd4特异性siRNA抑制前列腺癌细胞的实验研究

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第1 章 文献综述

1.1 前列腺癌

1.2 RNAi 与siRNA研究现状

1.2.1 RNA 干扰技术

1.2.2 siRNA新药研究的进展及面临的挑战

1.3 基因载体

1.3.1 纳米基因载体

1.3.2 阳离子纳米载体

1.3.3 阳离子聚合物PGEA及其衍生物作为小干扰RNA载体的相关研究

1.4 BRD4 与前列腺癌

第2 章 材料方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验所用细胞株

2.1.2 实验试剂

2.1.3 主要仪器

2.2 方法

2.2.1 合成PGEA-CHO纳米材料

2.2.2 PGEA-CHO与小干扰RNA的结合

2.2.3 细胞培养

2.2.4 CCK-8检测 PGEA-CHO 对 PC-3及RM-1的细胞毒性作用

2.2.5 PGEA-CHO/FAM-si-RNA 复合物在 PC-3 及 RM-1 细胞中的转染过程

2.2.6 Annexin V-FITC检测细胞凋亡

2.2.7 克隆形成实验

2.2.8 RT-PCR检测mRNA表达

2.2.9 Western blot测蛋白表达

2.2.10 统计分析

第3 章 实验结果

3.1 前列腺癌细胞中Brd4表达显著高于正常前列腺上皮细胞

3.2 成功合成结构稳定、性能均一的PGEA及PGEA-CHO

3.3 琼脂糖凝胶电泳检测PGEA-CHO与siBrd4 的结合能力

3.4 评估PGEA-CHO与FAM-siRNA在不同比例下对转染效率的影响

3.4.1 CCK-8方法检测PGEA-CHO对PC-3及RM-1细胞的毒性作用

3.4.2 PGEA-CHO/FAM-siRNA在PC-3和RM-1细胞中的转染情况

3.5 PGEA-CHO 携带siBrd4 转染PC-3 细胞及RM-1 细胞后Brd4的mRNA表达水平

3.6 PGEA-CHO 携带siBrd4 转染PC-3 及RM-1 细胞后Brd4蛋白表达水平

3.7 PGEA-CHO-siBrd4抑制PC-3及RM-1细胞活力和增殖能力

3.8 PGEA-CHO-siBrd4 对PC-3 及RM-1 细胞凋亡的影响

3.9 PGEA-CHO-siBrd4 对PC-3 及RM-1 细胞Brd4相关基因c-MYC的mRNA及蛋白表达水平的影响

第4 章 讨论

第5 章 结论

参考文献

作者简介及在学期间所取得的科研成果

致谢