Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D的表达、纯化、结晶以及结构解析

摘要

疱疹病毒是一种常见病原微生物，在自然界中能感染众多宿主。单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type，HSV）是疱疹病毒科α亚科，其复制周期短，繁殖速度快。根据血清型分类，HSV分为两个种类，分别是I型单纯疱疹病毒（HSV-1）和II型单纯疱疹病毒（HSV-2）。HSV-1易感染人的口腔以及眼上皮细胞，导致口腔疱疹、单纯疱疹病毒性角膜炎等疾病。HSV-2则主要感染人的生殖系统，引起生殖器疱疹。该性病的发病率仅次于淋病和梅毒。HSV-1和HSV-2均能潜伏感染神经细胞。不论是HSV-1还是HSV-2，单纯疱疹病毒感染细胞都离不开三个过程：粘附、受体结合、融合。在这三个过程中，HSV囊膜上的糖蛋白起到了重要作用。gC和gB与受体结合后使得病毒的囊膜和细胞的脂质膜靠近，从而病毒粘附在细胞上。gD与nectin-1/nectin-2、HVEM、3O硫酸乙酰肝素、gB与PILRα、NonmusclemyosinIIA进行受体识别和结合。之后形成的gD、gB、gH和gL的四元复合物引发膜融合。其中gD在病毒与宿主细胞的膜融合过程中作用关键。根据已经解析的HSV-1gD以及其与受体HVEM的复合体的结构发现，gD的C端回折缠绕在N 端的受体结合位点，但当受体结合时，C端让出该结合位点。而C端与gB、gH和gL形成融合符合物。由于HSV-1和HSV-2二者感染的细胞不同，并且不同株系病毒的囊膜蛋白gD选择的受体也有所不同。为了了解HSV-1gD和HSV-2gD在受体选择上的差异，需要进一步研究这两种蛋白与其受体结合的细节。而目前所得到的gD蛋白结构仅是HSV-1KOS株的gD（1259）、（1306）以及与HVEM的复合物结构，并没有HSV-2gD的结构。故在本文中利用杆状病毒表达系统表达出HSV-2stain333的gD蛋白的胞外部分区域（1285aa），经过NiNTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后，浓缩至5mg/ml和10mg/ml，进行悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体的生长条件，并得到初筛的晶体。在初筛的晶体生长条件下进行优化。优化后的晶体生长条件为0.1M HepespH7.2，5％(v/v)MPD，10％ PEG10000，18oC。经过X射线衍射后，得到了分辨率为1.8℃的一套晶体衍射数据。分析后的数据显示晶体属于P21空间群，晶胞参数为a=63.6,b=55.4,c=65.3(A),β=96.3°。

目录

文摘

英文文摘

声明

1.文献综述

2.前言

3.材料与方法

4. 结果与分析

5. 讨论与展望

参考文献

附录

致 谢

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