山核桃蒲黄酮类化合物的提取、纯化、抗氧化性及鉴别

摘要

本研究以山核桃蒲为原料，采用超声波辅助提取其中总黄酮，然后以大孔吸附树脂对其进行纯化，并对得到的总黄酮提取物进行抗氧化性研究，运用HPLC/Q-TOF-MS方法对纯化后的总黄酮提取物进行分析。研究结果如下：
　　 (1)采用超声波辅助提取山核桃蒲总黄酮，以总黄酮得率、纯度为考察指标，在超声波功率250W的条件下，对料液比、超声提取时间、提取温度和乙醇水溶液的浓度4个因素进行单因素试验。在单因素试验的基础上，选择对总黄酮得率、纯度的影响显著的3个试验因素，进行二次通用旋转试验，得到超声波辅助提取总黄酮的最佳工艺条件：料液比1:12、温度72℃、提取时间52min。此条件下总黄酮得率2.19％，纯度可达到16.62％。
　　 (2)以最佳工艺条件大量提取山核桃蒲总黄酮，以回收率、纯度为考察指标，通过4种不同型号的树脂对山核桃蒲总黄酮静态、动态吸附解吸试验，确定D101为山核桃蒲总黄酮分离纯化的适宜大孔树脂。D101型树脂最佳工艺条件为：上样液浓度应小于9.9mg/mL，上柱总黄酮量与干树脂之比为1:8，用5BV的70％乙醇水溶液洗脱。山核桃蒲总黄酮回收率在70％以上，纯度可达67％以上。
　　 (3)纯化后的山核桃蒲总黄酮提取物和VC对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子的清除效果以及还原力都与其浓度呈正相关。山核桃蒲总黄酮提取物对DPPH自由基、羟基自由基的清除效果以及还原力均低于VC，两者之间的差距随着浓度的增加而增大。在低浓度时，总黄酮提取物对超氧阴离子的清除能力略强于VC，之后随着浓度的增加，VC清除能力大于总黄酮提取物。总黄酮提取物对DPPH自由基的IC50为0.039mg/mL，维生素C的IC50为0.035mg/mL。总黄酮提取物对羟基自由基的IC50为0.309mg/mL，维生素C的IC50为0.172mg/mL。总黄酮提取物对超氧阴离子的IC50为0.113mg/mL，维生素C的IC50为0.110mg/mL。
　　 (4)对纯化后的山核桃蒲总黄酮提取物，根据HPLC/Q-TOF-MS方法对分离出的主要峰进行分析，采用正离子模式，由一级质谱得到化合物的准确分子量，借助masslynx软件计算出其元素组成。依据二级质谱中的碎片信息，并参考相关文献中的数据，确定7个主要化合物分别为5-羟基-6，7-二甲氧基黄烷酮、大黄素甲醚、大黄酚、5-羟基-4’，7-二甲氧基黄烷酮、乔松酮、乔松素、7-羟基-2’，4’-二甲氧基黄烷酮。其中，大黄素甲醚和大黄酚属于蒽醌类，其余5种皆为黄酮。