应用染色质免疫沉淀技术研究HCMV即刻早期蛋白IE1与染色质DNA的作用

摘要

[目的]: 建立有效的染色质免疫沉淀(ChIP)技术和随机扩增多态性DNA聚合酶链式反应(RAPD) 分析方法，并利用ChIP—RAPD分析方法筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IEl作用的宿主细胞染色质DNA。 [方法]: 用感染复数(MOI)值=5.8的HCMV ADl69病毒液感染人胚肺成纤维细胞(HEL)细胞。用甲醛溶液分别交联固定感染后2h、4h的IEl蛋白-DNA复合体。利用IEl的单克隆抗体通过ChIP技术分别处理该复合体，纯化回收ChIP产物，并经RAPD PCR筛选具有共同特异性的未知DNA序列。纯化回收筛选出来的未知DNA序列，通过TA克隆和蓝白筛选处理后，利用通用引物测序确定DNA序列，并进行同源性分析和外显子预测，推断可能编码的蛋白。 [结果]: 结果显示，HCMV感染后2h和4h， ChIP产物经不同随机引物扩增后存在约800bp和600bp的共同特异性产物；经克隆测序后进行核苷酸序列分析显示，此两条DNA序列与已知人类基因序列无显著同源性，确认为未知的序列，分别命名为序列1和序列2。 [结论]: 成功建立了研究与HCMV IEl蛋白作用的染色质DNA的ChIP—RAPD分析方法，为进一步研究HCMV病毒蛋白与宿主细胞染色质DNA的相互作用奠定了实验基础；经ChIP-RAPD筛选得到了两条与：HCMV IEl作用的染色质DNA：序列1和序列2，但其功能有待进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

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缩略词表

前言

第一章材料和方法

第二章结果

第三章分析与讨论

第四章结论

第五章参考文献

综述 染色质免疫沉淀技术在人巨细胞病毒即刻早期蛋白研究中的应用

致谢

攻读学位期间主要的研究成果