猪THRSP基因启动子SNP及其对基因表达的影响

摘要

猪肉是中国消费者动物蛋白质来源之一，猪肉品质一直倍受人们的关注。猪肉中的脂肪及其含量是猪肉品质和风味形成的重要决定因素，决定了猪肉的多汁性和口感。THRSP基因参与调控猪肉脂肪沉积，该基因的变异是调节脂肪合成和分解相关基因表达的关键因素。
　　本研究以定远猪类群为材料，检测获得THRSP基因启动子区5个SNP位点，构建了5个基因型的双萤光素酶报告基因重组质粒，并与pRL-CMV质粒共转染293T细胞，利用荧光素酶检测系统对转染细胞进行检测，分析不同基因型启动子的效率，并通过THRSP基因表达的实时荧光定量PCR和不同类型猪该基因的频率分布验证结果，分析启动子SNP位点与THRSP基因表达之间的关联性。结果表明：
　　研究所发现的5个突变位点分别是位于CDS上游的A-95T、G-98A、A-376G、T-400C和 C-459T，并且位于THRSP基因的启动子区域。
　　利用5个SNP位点的联合基因型构建双萤光素酶报告基因重组质粒，与pRL-CMV共转染293T细胞，检测其转染后的启动子效率以TCAGA联合型最高，TCAGA的启动效率较CTGGA高129％，CCAGA、CTAGA和CTGAT的启动效率较CTGGA分别低99％、73.2％和42.6％。TCAGA的启动子效率较CCAGA高756％，CCAGA比CTAGA低96.6％。
　　分析THRSP基因的表达水平与不同启动子效率呈显著的相关性（P<0.05），并与瘦肉型猪群和脂肪型猪群这些SNP位点的基因频率分布规律一致。可见，THRSP基因启动子区的A-95T、G-98A、A-376G、T-400C和 C-459T位点是THRSP基因表达水平差异的关键调控者。

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文 献 综 述

1 引言

2 材料和方法

2.1样品采集及主要试剂和仪器

2.2 DNA提取与检测

2.3目标片段的扩增及检测

2.4 PCR产物纯化和基因型筛选

2.5 pGL3-Basic-THRSP-promoter重组质粒的建立

2.6 293T细胞培养

2.7 重组质粒的细胞转染

2.8 实时荧光定量PCR验证

2.9 统计分析

3 结果与分析

3.1 THRSP基因启动子片段的PCR扩增结果

3.2 目的片段的序列及其SNPs

3.3 不同类型猪THRSP基因启动子SNP分布特点

3.4 不同启动子的双报告基因表达结果

3.5 启动子变异与THRSP 基因表达的关联性

4 讨论

4.1 猪脂肪沉积

4.2 启动子SNP位点与基因表达调控的关系

4.3不同类型猪的基因频率的分布

5 结 论

参考文献

致谢

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