金属硫蛋白MT-2A基因启动子多态性与人体血铅、血镉负荷检测分析及关联研究

摘要

金属硫蛋白(MT)基因是重金属毒性反应中最重要的应答基因,它编码富含半胱氨酸的小分子蛋白质,起到维持金属离子内稳态、重金属的解毒、清除自由基及抗氧化损伤等重要作用。通过监测生物体内MT含量变化,可预测生物体受重金属暴露的状况和重金属的污染程度,故MT是目前监测与预防环境中重金属污染的重要生物标志物。对其基因家族中各基因亚型的众多单核苷酸多态性(SNP)位点的研究有助于人们更好地了解MT基因对人体重金属代谢中的具体作用,具有十分重要的研究价值。　　MT-2A基因是MT基因家族中表达最丰富的基因亚型,它是重金属污染中重要的应答基因。基因启动子是操纵基因表达的核心区域。在MT-2A基因启动子核心区域内的SNP位点中,已有报道显示rs28366003位点会影响MT基因的表达。在本课题中,为了探讨MT-2A基因该位点单核苷酸多态性对人体血铅、镉负荷的作用,我们通过磁性纳米微阵列技术的建立和优化,对职业性暴露人群和非职业性暴露对照人群进行了MT-2A基因启动子核心区域rs28366003位点的SNP分型初步筛选,并利用限制性酶切技术和DNA测序技术进行验证。同时,采用石墨炉原子吸收法对所有研究对象的血铅及血镉含量进行检测,并将SNP分型结果与该人群体内血铅、血镉负荷进行关联分析。　　我们成功建立并优化了基于磁性纳米微阵列技术的MT-2A基因启动子核心区域rs28366003位点的SNP分型分析,并通过研究对象的血铅及血镉含量检测及相关性分析,结果发现年龄和性别对人体内血铅、血镉负荷没有显著关联(P>0.05),吸烟对正常人血铅、血镉负荷有显著影响(P<0.05),但对职业性接触人群血铅、血镉负荷没有显著影响(P>0.05)。MT-2A基因rs28366003位点单核苷酸多态性对人体血铅、镉负荷存在显著关联(P<0.05),等位基因G是重金属蓄积的重要因素。

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第一章 绪论

1.1 金属硫蛋白与重金属铅、镉污染的研究现状

1.2金属硫蛋白基因多态性及其生物学意义

1.3单核苷酸多态性（SNP）及其研究现状

1.4 本论文研究内容

第二章 基于磁性纳米颗粒微阵列技术的MT-2A基因启动子单核苷酸多态性分析及优化

2.1 研究基础

2．2 实验材料与试剂

2.3 实验方法

2.4 实验结果与讨论

2.5 两种检测手段对SNP分型结果的验证

2.6 小结

第三章 基于石墨炉原子吸收法的人体血铅、血镉含量检测

3.1 研究基础

3.2 实验材料与试剂

3.3 实验方法

3.4 实验结果与讨论

3.5 小结

第四章 MT-2A基因启动子多态性与铅、镉负荷的关联研究

4.1 研究基础

4.2 检测方法的介绍

4.3 统计分析

4.4 小结

第五章 总结与展望

5.1 总结

5.2 展望

参考文献

攻读学位期间主要的研究成果

致谢