缩略词表
1 绪论
1.1 引言
1.2 花色苷概述
1.2.1 花色苷的结构与性质
1.2.2 花色苷的功能
1.3 花色苷的生物合成和转录调控
1.3.1 花色苷的生物合成
1.3.2 花色苷的合成转录调控
1.4 茄子花色苷生物合成研究
1.5 研究目标与内容
2 材料与方法
2.1 材料、仪器与试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 仪器与设备
2.1.3 试剂与培养基
2.2 花色苷含量测定
2.3 花色苷合成调控和结构基因的表达模式研究
2.3.1 实验材料收集
2.3.2 基因组DNA提取
2.3.3 植物总RNA的提取
2.3.4 cDNA的合成
2.3.5 qPCR分析
2.4 基因克隆及序列分析
2.4.1 SmTT8基因的克隆
2.4.2 SmTT8基因的序列分析
2.5 SmTT8基因沉默载体的构建
2.5.1 SmTT8基因特异性片段的寻找
2.5.2 引物设计
2.5.3 构建重组质粒pHBLD-SmTT8
2.5.4 构建重组质粒pBIN-SmTT8
2.6 农杆菌的结合转移
2.7 茄子的遗传转化
2.7.1 农杆菌菌液的制备
2.7.2 外植体的获得
2.7.3 转基因植株的获得
2.8 SmTT8-RNAi阳性株系的筛选及沉默效率的鉴定
2.8.1 SmTT8-RNAi阳性株系的筛选
2.8.2 SmTT8在阳性转基因植株中的表达水平分析
2.9 SmTT8调节茄子果实着色的转录组分析
2.9.1 实验材料的获得
2.9.2 转录组数据的验证
2.10 SmTT8调节茄子果实着色的代谢组分析
2.10.1 样品代谢物提取
2.10.2 样品代谢物检测
2.10.3 代谢物定性定量分析
2.11 其他代谢物的含量测定
2.11.1 叶绿素含量测定
2.11.2 原花色苷含量测定
2.11.3 木质素含量测定
2.12 在烟草叶片中瞬时表达验证SmTT8的功能
2.12.1 SmTT8和SmMYB1过表达载体的构建
2.12.2 SmTT8和SmMYB1对烟草叶片花色苷的调控作用
2.13 花色苷合成结构基因启动子的激活
2.13.1 pDFR∷GUS和pANS∷GUS重组质粒的构建
2.13.2 SmDFR和SmANS的启动子的活性
3 结果与分析
3.1 SmTT8克隆与序列分析
3.1.1 SmTT8的序列分析
3.1.2 SmTT8的系统进化分析
3.2 茄子不同组织中花色苷结构基因和调控基因的表达模式分析
3.2.1 茄子不同组织中花色苷含量分析
3.2.2 茄子不同组织中花色苷结构基因的表达模式分析
3.2.3 茄子不同组织中花色苷合成调控基因的表达模式分析
3.3 SmTT8沉默载体的构建
3.4 转基因茄子的培育与筛选
3.4.1 转基因茄子的获得
3.4.2 转基因茄子幼苗的阳性筛选
3.5 SmTT8在转基因茄子中的表达水平分析
3.6 SmTT8基因特异性沉默阻断茄子花色苷生物合成
3.7 转录组分析
3.7.1 RNA-Seq测序质量分析
3.7.2 差异表达基因数目分析
3.7.3 差异基因的GO富集分析
3.7.4 差异表达基因的KEGG通路富集分析
3.7.5 苯丙烷代谢途径关键基因的表达分析
3.7.6 qRT-PCR验证
3.8 差异代谢物分析
3.8.1 SmTT8基因的特异性沉默导致果实褐化加快
3.8.2 SmTT8基因的特异性沉默抑制类黄酮的生物合成
3.9 SmTT8与SmMYB1协同调控花色苷的积累
3.10 SmTT8与SmMYB1协同调节SmDFR和SmANS的表达活性
4 讨论
4.1 SmTT8介导光信号调控茄子果实花色苷的生物合成
4.2 SmTT8和SmMYB1协同调控花色苷的生物合成
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
附录
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢
郑州大学;
