RNA m6A修饰调控MDSC的分化及其免疫抑制功能

目录

声明

中英文缩略词表

前言

材料与方法

1 研究对象

2 主要试剂

3 主要试剂的配制

4 主要仪器

5 MDSC的体外诱导

（1）获取BMC

（2）裂解红细胞

（3）诱导MDSC

（4）检测MDSC

6 小鼠CD8+细胞的获取及培养

（1）获取脾脏细胞

（2）裂解红细胞

（3）磁珠孵育

（4）收集CD8+T淋巴细胞

（5）活化CD8+T淋巴细胞

7 患者外周血MDSC的分离

（1）获得患者PBMC

（2）流式分选

8 总RNA的提取与质控

9 反转录

（1）去除基因组DNA

（2）反转录

10 引物设计（购自上海生物工程有限公司）

11 实时荧光定量聚合酶链反应（Real time PCR, RT-PCR)

12 流式细胞术

（1）检测细胞表面分子表达

（2）检测细胞内因子表达

13 m6A RNA甲基化定量检测

（1）准备RNA

（2）缓冲液和溶液的制备

（3）结合RNA

（4）捕获m6A RNA

（5）检测信号

（6）计算m6A含量

14 CFSE增殖检测

15 蛋白印迹（Western blot）

（2）BCA法检测蛋白浓度

（3）SDS-PAGE电泳

（4）转膜

（5）脱脂奶粉封闭

（6）孵育一抗

（7）孵育二抗

（8）ECL显像

16 统计学处理

结果

1 利用细胞因子诱导MDSC的形成并检测其m6A甲基化水平的改变

2 降低m6A甲基化水平改变MDSC的分化状态

3 降低m6A甲基化水平增强MDSC的免疫抑制功能

4 MDSC m6A甲基化修饰水平的降低与METTL3基因表达减少相关

5 LUAD患者中METTL3低表达与不良预后相关

讨论

结论

参考文献

综述:m6A甲基化修饰在肿瘤及肿瘤免疫中的调控作用

参考文献

个人简历、在校期间发表的学术论文与研究成果

致谢