HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者分流管理的随访研究

摘要

宫颈癌(cervical cancer)是全球女性人群中发病率仅低于乳腺癌的恶性肿瘤，随着宫颈癌癌前病变筛查的普及和宫颈癌HPV疫苗的应用，宫颈癌发生率和死亡率显著下降，但临床上对宫颈细胞学诊断结果为不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS)患者的管理十分混乱。针对ASCUS患者，临床上目前采用的处理方法包括：①直接行阴道镜活检;②行高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)检测进行分流;③保守治疗。其中，行HR-HPV检测是指南所推荐的，但是仍有多项研究表明HR-HPV检测用于ASCUS患者的分流虽然降低了阴道镜检查的转诊率及宫颈高级别病变的漏诊率，但其高敏感性、低特异性的特点仍然造成过度治疗，加重了患者的经济及心理负担。因此，临床上需要一种准确度更高的检测手段分流管理ASCUS患者。　　众所周知，宫颈癌的发生发展与HPV的持续感染密不可分，而大多数HPV感染为一过性感染，当宫颈组织HPV持续感染时HPV E6/E7基因会发生过表达。HPV癌基因的活性转录及其对宿主细胞的影响可以通过检测病毒E6/E7mRNA的转录直接监测。因此，HPV E6/E7mRNA检测可以更精准、更有效地发现HPV持续感染的患者，从而更好地对ASCUS患者进行分流管理及随访。　　目的：本研究通过对宫颈细胞学结果为ASCUS的患者的HR-HPV DNA检测结果、HR-HPV E6/E7mRNA检测结果及其阴道镜下活检病理结果进行分析，并对病理活检阴性的ASCUS患者进行随访，探讨HR-HPV E6/E7mRNA检测在ASCUS患者分流管理及随访中的价值，为指导临床处理提供客观依据。　　方法：1.统计在2015年12月至2017年8月期间，于郑州大学第三附属医院进行宫颈脱落细胞学检测的患者共计40087例，剔除不满意标本74例，共收集40013例患者宫颈脱落细胞标本，详细记录所有患者的细胞学诊断结果，并从中筛选出诊断结果为ASCUS且采用杂交捕获Ⅱ(HC-Ⅱ)方法检测HR-HPV DNA的患者297例，收集这些患者的宫颈脱落细胞有效剩余标本液，详细记录其HR-HPV DNA检测结果。研究中的所有患者都签署了知情同意书，本研究经郑州大学附属第三附属医院生命伦理评审委员会批准。　　2.HPV DNA检测：采用第二代捕获杂交法(the hybrid capture，HC-Ⅱ)，根据所测得的相对光单位/临床阈值(relative light units/cut off，RLU/CO)作为HPV感染与否的判定依据。　　3.HPV E6/E7mRNA检测：采用Aptima(transcription mediated amplification，转录介导的等温扩增技术)检测14种高危型HPV的E6/E7mRNA，并采用Aptima HPV16、18/45分型检测试剂盒对所有标本进行基因分型。　　4.采用电子阴道镜系统对所有入选患者行阴道镜检查以及宫颈组织活检。所有宫颈活检病理标本由我院病理科3名资深的病理医师进行阅片并作出最终的宫颈病理诊断。　　5.对活检病理阴性（正常及LSIL）且未行破坏性治疗的患者随访至少1年，1年后行TCT及高危型HPV联合检测，除TCT结果正常且高危型HPV阴性的患者外，其他结果的患者均行阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查，共成功随访142例患者。　　统计学分析　　所有数据均采用SPSS21.0软件进行统计学分析。TCT结果分析采用例(％)表示，ASCUS患者单因素分析定性变量间差异的比较采用卡方(x2）检验，当P＜0.05时则差异有统计学意义，采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)分析HPV E6/E7mRNA检测对预测HSIL+的检测效能。　　结果：1.2015年12月-2017年8月收集40013例TCT结果，其中异常细胞结果共1207例，检出率为3.02％，分别为：ASCUS734例(1.83％)，LSIL214例(0.53％)，HSIL128例(0.32％)，非典型鳞状细胞不除外高度病变(ASCUS，cannot excludeHSIL，ASC-H)98例(0.24％)，LSIL不除外HSIL(LSIL，cannot exclude HSIL，LSIL-H)11例(0.03％)，非典型腺细胞(AGC)16例(0.04％)，宫颈鳞癌(ACC)及腺癌(AC)6例(0.01％)。　　2.初次检查结果：统计符合纳入标准的297例ASCUS患者的阴道镜下活检病理结果，分别为宫颈炎136例(45.79％)，LSIL108例(36.36％)，HSIL50例(16.84％)，宫颈癌3例(1.01％);HPVDNA检测、HPV E6/E7mRNA检测检出HSIL+的敏感性差异无统计学意义(P＞0.05)，特异性差异有统计学意义(x2=36.51，P＜0.001)。　　3.1年后随访时复查结果：142例患者随访时TCT结果正常且高危型HPV阴性者88例，高危型HPV阳性和（或）TCT结果＞正常但经阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查诊断为炎症22例、LSIL22例（其中2例是由炎症进展为LSIL）、HSIL10例。HPV E6/E7mRNA、HPV DNA检测1年后HSIL+的敏感性均100％，(P＞0.05)差异无统计学意义;而特异性分别41.66％、9.85％，(x2=34.94，P＜0.001)差异有统计学意义。HPV E6/E7mRNA检测的约登指数(Youden index)为0.4166明显高于HPV DNA检测的0.0985。　　4.初次HPV E6/E7mRNA检测诊断1年后HSIL+的ROC曲线下面积为0.708（P=0.028），而HPV DNA检测诊断1年后HSIL+的ROC曲线下面积为0.549(P=0.604)。　　结论：1.分流ASCUS患者时，HPV E6/E7mRNA检测较HPV DNA检测更有优势。　　2.HPV E6/E7mRNA检测可以更好地，有针对性地用于宫颈活检病理阴性的ASCUS患者进行随访。

目录

声明

摘要

中英文缩略对照表

1 引言

2研究对象和方法

2．1研究对象及纳入标准

2．2实验方法

2．3统计学方法

3结果

3．1 TCT结果

3．2 ASCUS的转归

3．3 HPV E6／E7 mRNA、HPV DNA检测对ASCUS患者中HSIL+检出比较

3．4 HPV E6／E7 mRNA、HPV DNA检测对预测病理阴性患者宫颈病变转归的准确性比较

3．5 ROC曲线分析初次HPV E6／E7 mRNA及HPV DNA检测对诊断1年后宫颈HSIL+情况的分析

4讨论

4．1 TCT结果分析

4．2 ASCUS的研究现状

4．3HPV DNA检测对ASCUS分流管理的意义

4．4HPV DNA检测对ASCUS患者的随访意义

4．6HPV E6／E7检测对ASCUS患者的随访意义

5 结论

参考文献

综述

个人简历和在校期间发表论文与研究成果

致谢