应用FR靶向PCR法检测CTC在肺癌诊断和术后随访中的临床价值研究

摘要

目的:　　肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一，并且在我国的发病率和死亡率中高居榜首。由于人口老龄化趋势，人类居住环境的持续恶化以及社会节奏的日益加快等各方面原因，目前肺癌的发病率和死亡率在全球呈明显的上升趋势，并呈现出年轻病例、晚期患者增多和女性患者比例上升的特点。造成肺癌高死亡率的主要原因是其起病隐匿，早期症状常常比较轻微，甚至可无任何不适的症状，绝大多数肺癌患者得到临床确诊时已是晚期，错过了最佳的手术时机，故而预后极差。Ⅰ期患者术后5年生存率约70％，相对而言，Ⅱ期患者的5年生存率约50％，而Ⅲ期能做手术或不能手术转行化疗与放疗联合治疗的患者5年生存率却仅为15-30％。因而我们可以看到，早发现，早诊断，早治疗是有效降低肺癌死亡率的重要措施。而最关键的一步是对肺癌的早发现，早诊断。　　目前主要的肺癌筛查手段是进行低剂量电子计算机断层扫描(ComputedTomograghy，CT)，能够有助于降低肺癌的病死率。但是作为一种影像学检查手段，不同的阅片者会存在主观上的差异，即使同一个阅片者在不同的时间段阅片时也会出现一定的变异性。另外，即使是低剂量CT，也无法忽视辐射带来的副作用。　　随着科学技术的快速发展，更加有效的肺癌早期诊断手段在不断涌现。近年来，循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell，CTC)领域成为了人们关注的热点，CTC即是指从恶性肿瘤的原发灶或转移灶脱落并进入外周循环的肿瘤细胞。由于CTC来源于肿瘤组织的各个部分，且CTC检测具备无创性及持续可重复性等优点，因而CTC检测在癌症的早期诊断、疗效监测、预后评估及个体化综合治疗等方面具备了巨大的临床应用潜力。目前，基于CTC的物理学及生物学特性，其检测方法也各不相同。本研究的目的是评价一种通过叶酸受体(Folate receptor，FR)检测循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell，CTC)的对肺癌进行临床诊断的实用性和可行性并探究CTC应用于肺癌术后复发预测的价值。　　方法:　　研究对象:2015年1月至2016年5月，本研究一共入组了97例首诊首治的肺癌患者（包括但不限于肺鳞癌与肺腺癌）。入组样本由郑州大学附属肿瘤医院胸外科提供。所有患者已经细胞学或组织病理学确诊。在研究之前，所有患者均未接受抗肿瘤治疗且既往无其他肿瘤病史。肿瘤分期根据第七版美国癌症联合委员会关于肺癌分期指南。此外，入组18例初治的肺部良性疾病的患者。　　检测器材及方法:格诺思博生物科技（上海）有限公司生产的CytoploRare(R)叶酸受体阳性循环肿瘤细胞检测试剂盒，上海圣科仪器设备有限公司生产的海门其林贝尔GL-802微型台式真空泵，美国应用生物系统公司生产的7300实时荧光定量PCR仪，贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司生产的贝克曼库尔特Allegra X-30多功能台式高速离心机，卡尤迪生物科技（北京）有限公司生产的H2O3系列金属冰浴，上海医疗器械工业公司医用吸引器厂生产的YBDX230电动吸引器。通过免疫磁珠负向富集方法从每个病例3ml外周血中捕获循环肿瘤细胞，再用肿瘤特异性叶酸配体-寡核苷酸偶和物标记捕获的循环肿瘤细胞，洗去没有结合的富余偶和物后，再次洗脱下特异性结合的偶合物的寡核苷酸链并用于定量PCR扩增分析。　　所有入组患者除以上检测外，另行NSE，CEA，Cyfra21-1等肿瘤标志物检测，并将各项指标的灵敏度，特异度行比较分析。　　统计学方法　　统计分析采用SPSS19.0(SPSS Inc，Chicago，IL)和Prism5.0(GraphPadSoftware Inc，San Diego，CA)处理。Folate Units采用中位值及四分位数间距进行描述。采用Mann-Whitney U检验分析比较两组之间CTC水平，采用Kruskal-Wallis检验比较多组之间CTC水平。通过受试者工作特征曲线(ReceiverOperating Characteristic Curve，ROC)分析得到区别癌症与非癌症患者的最佳截域值(cutoff)，并计算得到每个指标的ROC曲线下面积(AUC)。所有统计P值都是双侧检测。规定P＜0.05为差异有统计学意义。　　结果:　　肺癌组97例患者的CTC水平显著高于肺部良性疾病组的患者(P＜0.001)。根据ROC曲线结果，选取约登指数最大值对应值即为cutoff值，该cutoff值为8.7Folate Units/3mL，对应的检测灵敏度为82.5％，特异性为72.2％，特别是在Ⅰ期肺癌中灵敏度达到86.8％。与其他肿瘤标志物(NSE、CEA、Cyfra21-1)比较，CTC对肺癌及Ⅰ期肺癌具有较高的诊断准确性(0.859;95％ CI，0.779-0.939)和(0.912;95％ CI，0.829-0.994)。5例肺癌患者术后2周内CTC水平高于cutoff值。　　结论:　　研究结果显示，叶酸受体阳性循环肿瘤细胞对肺癌的临床诊断具有潜在的应用价值，尤其是对早期NSCLC的诊断。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

附录

参考文献

综述

个人简历、攻读硕士学位期间发表的文章

致谢