TGF-β1、Smad3和CTGF在女性压力性尿失禁患者阴道壁组织中的表达及意义

摘要

压力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence，SUI)被认为是尿道对控尿起“开关-阀门”失控引起的功能障碍性疾病，多数患者由于分娩、创伤等引起肛提肌损伤、盆底筋膜和韧带松弛、泌尿道解剖位置改变所致。SUI是一种多因素参与的复杂性疾病，往往伴随女性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse，POP)。其特点是平时无漏尿，如咳嗽、大笑、重体力劳动等腹压增加时，尿液不自主地自尿道流出，且症状严重程度随年龄的增长而加重，在美国60岁及以上38％妇女及17％男性均患有尿失禁。因此，国际控尿协会将SUI定义为腹压突然增加时导致尿液失控不自主流出，其病因非逼尿肌收缩压引起而是盆底解剖结构出现异常或缺损致压力传导不均。有人将该病形象的称为“社交癌”。虽然压力性尿失禁不像心血管、肿瘤等疾病严重危及患者的生命健康，却也引起了社会、经济和卫生等不同程度的影响;其严重程度越来越受到广大妇女的关注。随着“吊床假说”和“盆底整体理论”的提出，人们逐渐意识到仅单纯检测尿道压、尿道长度及膀胱尿道角等解剖改变的传统方法已经无法全面合理解释SUI的发病机制，这就促使研究人员从分子生物学水平深入研究盆底支持组织的解剖结构及功能。众多研究表明，女性SUI患者盆底支持结构中胶原及弹性蛋白含量显著减少，引起支持组织弹性减弱，出现盆底松弛。而转化生长因子-β1(TGF-β1)作为最重要的细胞因子，既与胶原和弹性蛋白的合成及降解直接相关，又可改变基质降解酶及其抑制因子的量及活性，在分娩、手术等造成盆底支持组织损伤修复过程中发挥关键性作用。结缔组织生长因子(CTGF)可刺激成纤维细胞增殖和分泌胶原，在纤维化性疾病、创伤后瘢痕形成等方面有较多的研究，然而在盆底障碍性疾病的研究国内外少有报道。而Smad3蛋白是细胞内TGF-β信号转导分子，对细胞功能起着双向调控作用，参与控制创面组织的愈合。　　目的：　　本研究通过采用免疫组化和聚合酶-逆转录(RT-PCR)方法检测TGF-β1、CTGF及Smad3三者在女性SUI患者阴道壁组织中的表达，分析三者之间的相关性，探讨他们在SUI发生机制中的作用，期望为该病的预防、治疗提供理论依据。　　材料和方法：　　1.材料　　选取2012年6月-2013年4月在本院妇产科收治的的60例中、重度压力性尿失禁患者为实验组，包括25例单纯性SUI，35例SUI合并POP，手术方式为经阴道无张力尿道中段悬吊术(trans-obturatorvaginaltape，TVT-O)、阴道前后壁修补术，阴道前壁悬吊术。同期选取20例宫颈上皮内瘤变患者均不伴SUI为对照组，手术方式为腹式或阴式子宫切除术。3组在年龄、产次及体重指数等方面差异无统计学意义(P＞0.05)，具有较好的可比性。所有病例均无类风湿性关节炎、甲状旁腺功能亢进、肺气肿和肝纤维化等影响胶原代谢的疾病，术前3个月内未曾使用过性激素类药物，未患功能性卵巢肿瘤，无泌尿生殖道感染，无既往盆底手术史。SUI诊断依据为患者的病史、妇科检查、压力试验、指压试验、尿垫实验及尿动力学检查结果。SUI合并POP诊断依据是除具有压力性尿失禁的诊断标准外，妇科检查均发现合并有POP-Q分类法Ⅱ度及以上的阴道前壁膨出。实验组于阴道前壁12点或膀胱宫颈韧带周围取两块阴道前壁组织各约0.8cm×0.5cm×0.2cm大小。对照组取自子宫切除后阴道残端阴道壁组织。　　2.实验方法　　采用免疫组化(SP)法检测SUI组、SUI+POP组和对照组患者阴道前壁组织中TGF-β1、CTGF和Smad3蛋白的表达情况。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测三组TGF-β1、CTGF和Smad3mRNA水平。　　3.统计学分析　　采用SPSS17.0统计软件对数据处理。多组定性资料的比较采用独立的多组二分类，两两比较采用四格表卡方检验，检验水准取α/3=0.0167;多组定量资料的比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t法。两连续变量相关分析采用Pearson积矩相关。检验水准α=0.05。　　结果：　　1.免疫组化染色结果　　SUI组、SUI+POP组和对照组3组患者阴道壁组织中均可见TGF-β1蛋白、CTGF蛋白和Smad3蛋白的表达。TGF-β1和CTGF蛋白主要表达于胞浆，呈现淡黄色至棕黄褐色的细胞为阳性细胞;Smad3蛋白主要表达于细胞核，呈现淡黄色至棕黄褐色颗粒的细胞为阳性细胞。　　1)TGF-β1蛋白在3组阴道壁中阳性表达率分别为28％、17.14％、95％，3组之间差异有显著性(x2=34.327，P＜0.01);SUI组和SUI+POP组比较，差异无显著性(P＞0.05)。　　2)CTGF蛋白在3组阴道壁中阳性表达率分别为16％、20％、95％，3组之间差异有显著性(x2=37.717，P＜0.01);SUI组和SUI+POP组比较，差异无显著性(P＞0.05)。　　3)Smad3蛋白在3组阴道壁中阳性表达率分别为24％、14.29％、90％，3组之间差异有显著性(x2=33.933，P＜0.01);SUI组和SUI+POP组比较，差异无显著性(P＞0.05)。　　2.RT-PCR结果　　半定量测定结果显示:TGF-β1mRNA、CTGFmRNA及Smad3mRNA在3组中均为阳性表达。　　1)TGF-β1mRNA在SUI组、SUI+POP组和对照组阴道壁组织中表达量分别为（0.294±0.013）、（0.293+0.019）和（0.610±0.052），SUI组、SUI+POP组与对照组比较差异均有显著性(P＜0.01);而SUI组与SUI+POP组比较差异无显著性(P＞0.05)。　　2)CTGFmRNA在SUI组、SUI+POP组和对照组阴道壁组织中表达量分别为（0.085+0.012）、（0.092±0.011）和（0.272±0.029），SUI组、SUI+POP组与对照组比较差异均有显著性(P＜0.01);而SUI组与SUI+POP组比较差异无显著性(P＞0.05)。　　3)Smad3mRNA在SUI组、SUI+POP组和对照组阴道壁组织中表达量分别为（0.091±0.011）、（0.088±0.012）和（0.272±0.029），SUI组、SUI+POP组与对照组比较差异均有显著性(P＜0.01);而SUI组与SUI+POP组比较差异无显著性(P＞0.05)。　　3.SUI患者组织中TGF-β1和CTGF的关联性分析　　相关分析显示:SUI组阴道壁组织中TGF-β1与CTGF呈正相关(r=0.959，P＜0.05)，TGF-β1与Smad3的表达呈正相关(r=0.944，P＜0.05)，CTGF与Smad3的表达呈正相关(r=0.965，P＜0.05)。　　结论：　　TGF-β1、CTGF及Smad3在患者阴道壁组织表达均降低，提示其可能参与了压力性尿失禁的发生，三者具有协同性。

目录

声明

摘要

中英文名词对照

1 引言

2 实验标本及仪器

3 实验方法

4 实验结果

5 讨论

6 结论

附图

参考文献

综述 压力性尿失禁患者发病机制的相关研究及治疗新进展

个人简历 攻硕期间发表的论文和学术研究成果

致谢