基于LC/MS法对尿样中修饰核苷作为肿瘤标志物的研究

摘要

癌症是严重威胁人类健康的疾病之一，但是，因为缺少有效的早期诊断手段，很多患者在发现时已经是中期或晚期了，因此寻找合适的肿瘤标志物非常重要。很多研究表明，尿液修饰核苷可以作为潜在的肿瘤标志物。本文的研究目的就是在优化的条件下，用高效液相色谱和质谱联用技术定性和定量分析尿液中的修饰核苷，考察其作为肿瘤标志物的可行性。　　 本文运用高效液相色谱/电喷雾-四极杆-飞行时间质谱，在优化的条件下从癌症病人尿液中检测到22种修饰核苷(包括未见报道的O6-乙基鸟苷和N7-甲基-N2-乙基鸟苷)，并对其进行了定量分析。结果表明：膀胱癌患者尿液中修饰核苷的含量普遍比正常人高，经统计学t检验，N1-甲基腺苷，O6-甲基鸟苷，N1-甲基次黄苷，N1-甲基鸟苷，N3-甲基胞苷，N3-甲基鸟嘌呤，核糖嘧啶羧氨基化合物(PCNR)，5’-脱氧-2’-脱氧次黄苷，N2，N2-二甲基鸟苷，N6-苏氨酸氨基甲酰腺苷和N3-甲基腺苷和正常人尿液中的含量相比具有显著性差异。　　 同时，用上述方法，研究了尿液修饰核苷在其它疾病诊断中应用的可能，分析了类风湿性关节炎患者和红斑狼疮患者尿液修饰核苷的变化，结果发现：在类风湿性关节炎患者非活动期腺苷、5’-脱氧-5’-甲基硫代腺苷、N1-甲基次黄苷、N1-甲基鸟苷、N3-甲基胞苷，黄嘌呤，5’或2’-O-甲基胞苷，N3-甲基鸟嘌呤，PCNR，5’-脱氢-2’-脱氧次黄苷，N2-甲基鸟苷，N3-甲基腺苷，N7-甲基-N2-乙基鸟苷和正常人比具有显著性差异。在红斑狼疮患者非活动期，N6-苏氨酸氨基甲酰腺苷、N3-甲基腺苷和O6-乙基鸟苷的含量和正常人比具有显著性差异，说明该方法对于非癌症的疾病诊断也有重要意义。　　 综上所述，本论文在优化的条件下分析了膀胱癌患者、类风湿性关节炎患者和红斑狼疮患者尿液中修饰核昔的排放水平，找出了一些可以作为潜在肿瘤标志物和风湿病标志物的修饰核苷，对于临床诊断、检测病情具有重要意义。

目录

文摘

英文文摘

第一章 综述

第一节 修饰核苷简介

1.1.1 修饰核苷的来源

1.1.2 尿液中修饰核茁概况

1.1.3 尿液修饰核苷作为肿瘤标志物的研究

第二节 尿液修饰核苷的检测方法

1.2.1 高效液相色谱(HPLC)法

1.2.2 免疫分析(ELISA)法

1.2.3 气相色谱(GC)法

1.2.4 高效毛细管电泳(HPCE)法

1.2.5 分离技术与质谱(MS)联用法

第三节 尿液中修饰核苷作为肿瘤标志物的可行性和前景展望

1.3.1 肿瘤患者与健康人尿液中修饰核苷的分析

1.3.2 研究意义

第二章 修饰核苷的合成

第一节 引言

第二节 实验部分

2.2.1 试剂与仪器

2.2.2 合成

2.2.3 化合物O6-正丙基次黄苷和N1-异丙基次黄苷的结构确证

2.2.4 结构表征

小结

第三章 HPLC/MS法对膀胱癌患者尿样中修饰核苷的分析

第一节 HPLC/ESI-Q-TOFMSMS法鉴定膀胱癌患者尿样中修饰核苷

3.1.1 引言

3.1.2 膀胱癌概述

3.1.3 实验部分

3.1.4 结果和讨论

第二节 HPLC/MS法定量分析膀胱癌患者尿样中修饰核苷

3.2.1 引言

3.2.2 实验部分

3.2.3 结果与讨论

第四章 HPLC/MS法对风湿病患者尿液中修饰核苷的分析

第一节 类风湿性关节炎患者尿液修饰核苷分析

4.1.1 实验部分

4.1.2 结果和讨论

第二节 红斑狼疮患者尿液中修饰核苷的分析

参考文献

论文总结

附录

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致谢