TGF-β1对滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系增殖侵袭的影响及机制研究

摘要

目的:滋养细胞是人体极为奇特的细胞，来源于胚胎的胚外层细胞，具有侵蚀性，在胚胎植入过程中，滋养层细胞发挥着类似肿瘤的特性而侵入子宫基质，相应的子宫反应内膜蜕膜化，包括细胞分化及细胞外基质重建，并创造了一个环境，在最初阶段允许滋养层细胞的侵入，继而又控制其过度侵入以形成胎盘。这一侵蚀过程，在时间及空间上受到母体及自身的多种旁分泌和自分泌因子的严格网络级联调控，其中任一环节发生异常，都有可能会导致自然流产、先兆子痫、妊高症、绒毛膜癌等妊娠相关疾病。转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)超家族是有许多细胞因子所组成的大家族，其信号沿TGF-β族配体→受体→SMADA蛋白→转录因子→DNA表达等步骤来控制调节细胞的增殖、分化、移行和凋亡。TGF-β1是最早证实参与滋养细胞侵入调节的细胞因子。研究发现，受孕子宫内膜表面上皮细胞、基质细胞、蜕膜细胞中TGF-β1及TβR较未孕时显著增加;胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及绒毛的间质滋养细胞均有TGF-β1的表达， TGF-β1调节滋养层的分化，即有助于滋养层的黏附，又避免滋养细胞过度增殖、浸润，但具体机制尚未阐明。本实验以滋养细胞HTR-8/SVneo细胞为模型，采用不同剂量外源性TGF-β1作用于HTR-8/SVneo细胞系，观察HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭改变，TGF-β1/Smads信号传导通路中关键组分Smad3、Smad7 mRNA的表达情况，进一步揭示该信号通路在滋养细胞调控机制中的作用，从而为滋养细胞疾病的治疗提供新的思路。　　 方法:　　 1.本文的研究对象为永生化的滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系。　　 2.取指数生长期的HTR-8/SVneo细胞按初始浓度为3×104/mL接种于96孔板，37℃、5％ CO2培养箱中培养，融合度达到60％后换成无血清培养基，使其继续饥饿同步化24h;然后分别给予2.5μg/L，5.0μg/L，10.0μg/L,12.5μg/L,15μg/L,25.0μg/L,50.0μg/L,100.0μg/L,200.0μg/L的TGF-β1对HTR-8/SVneo细胞进行外源性干预，分别于24h、48h、72h终止培养并收获细胞;同时设立零对照组及空白对照组，每组设6个平行孔，采用MTT比色法检测各组细胞的增殖活力;　　 3.以3×104/mL细胞浓度将HTR-8/SVneo细胞接种到6孔板，融合度达到60％后换成无血清培养基，使其继续饥饿同步化24h，加入不同浓度的人重组TGF-β1，即终浓度分别为0μg/L（对照组），1.0μg/L，10.0μg/L，100.0μg/L，共温育48h后终止培养，采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测各组Smad3、Smad7 mRNA表达情况;　　 4.以1×105/mL的细胞浓度将HTR-8/SVneo细胞接种于Transwell小室，分别加入0μg/L（对照组)，1.0μg/L，10.0μg/L，100.0μg/L TGF-β1共培养48小时，采用Transwell侵袭法检测HTR-8/SVneo细胞的侵袭力。　　 结果:　　 1.以不同剂量TGF-β1分别作用于HTR-8/SVneo细胞24、48、72h后，在TGF-β1浓度相对较低时(0-15.0μg/L)，HTR-8/SVneo细胞随着TGF-β1浓度的增加细胞增殖情况逐渐明显，但是当TGF-β1浓度相对较大时(15.0-200.0μg/L)，细胞的增殖情况又逐渐减弱，总体呈抛物线性变化，与0μg/L对照组比较，TGF-β1浓度为10.0-15.0μg/L显著增高（P＜0.05）。　　 2.与对照组比较，10.0μg/L TGF-β1组HTR-8/SVneo细胞的Smad3mRNA的表达量显著下降(P＜0.05)，Smad7 mRNA的表达量显著增高(P＜0.05)，1.0μg/L、100.0μg/L TGF-β1组mRNA的表达没有明显改变(P＞0.05)。　　 3.与对照组比较，TGF-β1各浓度处理组HTR-8/SVneo细胞穿膜数量明显增加，侵袭力增强(P＜0.05)。　　 结论:　　 1.外源性TGF-β1在10.0-15.0μg/L时可能促进了滋养细胞HTR-8/SVneo细胞的增殖。　　 2.10.0μg/L TGF-β1作用下，HTR-8/SVneo细胞Smad3 mRNA的表达显著下降，Smad7 mRNA表达显著增高，10.0μg/L TGF-β1促进HTR-8/SVneo细胞的增殖与Smad3、Smad7的表达发生改变是否存在着联系，有待进一步探讨。　　 3.外源性TGF-β1能够以浓度依赖性促进了滋养细胞HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 数据统计

结果

1 不同浓度外源性TGF-β1对滋养细胞HTR-8／SVneo增殖能力的影响

2 不同浓度外源性TGF-β1对滋养细胞HTR-8／Svneo细胞中Smad3、Smad7 mRNA的影响

3 不同浓度外源性TGF-β1对滋养细胞HTR-8／SVneo侵袭能力的影响

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 TGF-β1／smad通路对滋养细胞增殖和浸润的影响的相关研究

致谢

个人简历