pat、fk、stpk基因敲除和mdh基因敲入对明串珠菌产甘露醇的影响

目录

声明

第一章 绪论

1.1 甘露醇的功能和应用

1.1.1 甘露醇的功能

1.1.2 甘露醇的应用

1.1.3 甘露醇的生产方法

1.2 明串珠菌概述

1.2.1 明串珠菌的特征

1.2.2 明串珠菌代谢途径

1.3 研究的背景及内容

1.3.1 研究背景

1.3.2 研究内容

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 菌株与质粒

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.1.4 引物

2.1.5 培养基与缓冲液

2.2 实验方法

2.2.1基因扩增

2.2.2 同源重组载体的构建

2.2.3 构建突变菌株

2.2.4 突变菌株的验证

2.2.5 构建互补型菌株

2.2.6 发酵检测

第三章 结果

3.1 基因扩增

3.1.1乙酰磷酸转移酶pat的扩增

3.1.2 pUC19-pat质粒的筛选与验证

3.2 同源重组载体的构建

3.2.1 pUC19-pat--质粒的构建

3.2.2 pUC19-fk--质粒的构建

3.2.3 携带有 α-amy基因的同源重组载体

3.2.4 携带有mdh基因的同源重组载体

3.3 突变菌株的构建

（1）单基因敲除菌株的构建

（2）基因敲入菌株的构建

（3）互补型菌株的构建

（4）双基因敲除和基因敲入菌株的构建

（4）多基因敲除和基因敲入菌株的构建

3.4 突变菌株的验证

3.5 菌株发酵与生理特性检测

第四章 讨论

4.1 无痕敲除

4.2 明串珠菌的甘露醇合成

4.3 pat基因敲除对甘露醇生产的影响

4.4 fk基因敲除对甘露醇生产的影响

4.5 stpk基因敲除对甘露醇生产的影响

4.6 mdh 基因敲除对甘露醇生产的影响

4.6多基因敲除和基因敲入对甘露醇生产的影响

第五章 结论

参考文献

附录A

附录B

附录C

附录D

攻读学位期间取得的相关科研成果

致谢