声明
第一章 绪论
1.1 前言
1.2 泛素-蛋白酶体系统
1.2.1 蛋白降解途径简介
1.2.2 泛素-蛋白酶体系统降解机制
1.3 泛素连接酶 E3 简介
1.3.1 泛素连接酶 E3 组成
1.3.2 SCF 复合物各组分简介
1.4 病原微生物 E3 组分的感染反应
1.5 小球藻病毒及其宿主
1.5.1 小球藻病毒的宿主-小球藻简介
1.5.2 小球藻病毒简介
1.5.3 小球藻病毒侵染宿主过程介绍
1.6 蛋白互作的研究方法进展
1.6.1 免疫共沉淀
1.6.2 酵母双杂交
1.6.3 pull-down 实验
1.7 小球藻病毒编码基因研究进展
1.8 研究目的及意义
第二章 酵母双杂交验证试验
2.1 试验材料
2.1.1 菌株、质粒和目的片段
2.1.2 培养基和试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 试验方法
2.2.1 Skp1 和 F-box 蛋白基因优化合成以及片段的扩增
2.2.2 酵母双杂交工作质粒的构建
2.2.3 酵母感受态的制备及酵母转化
2.2.4 酵母自激活与毒性检测
2.2.5 选择培养基共转化验证
2.3 试验结果
2.3.1 Skp1 和 F-box 蛋白基因优化合成以及片段的扩增
2.3.2 酵母双杂交工作质粒的构建
2.3.3 酵母自激活与毒性检测
2.3.4 选择培养基共转化验证
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 病毒-细胞混合型 SCF 复合物初步重建
3.1 试验材料
3.1.1 细胞系、实验菌株
3.1.2 培养基和试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 试验方法
3.2.1 融合蛋白基因优化合成以及片段的扩增
3.2.2 转染质粒的构建
3.2.3 去内毒素质粒的提取
3.2.4 质粒转染 293T细胞
3.2.5 免疫沉淀试验
3.2.6 western blot 检测
3.3 试验结果
3.3.1 转染质粒构建结果
3.3.2 质粒转染 293T细胞效率
3.3.3 western blot 检测结果
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 病毒蛋白的表达及与宿主蛋白的Pulldown 实验
4.1 试验材料
4.1.1 菌株、质粒
4.1.2 培养基与试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 试验方法
4.2.1 PBCV-1 Skp1 片段的扩增
4.2.2 重组质粒 pEGX-6P-1-cvSkp1 的构建
4.2.3 重组质粒的转化与鉴定
4.2.4 蛋白提取与鉴定
4.2.5 cvSkp1 融合蛋白大量提取
4.2.6 病毒 PBCV-1 感染的小球藻 NC64A裂解液的制备
4.2.7 Pulldown 实验
4.2.8 银染试验
4.2.9 质谱检测
4.3 试验结果
4.3.1 pGX-6P-1-cvSkp1 融合蛋白基因片段的扩增及载体构建
4.3.2 pEGX-6P-1-cvSkp1 融合蛋白的表达与纯化
4.3.3 Pulldown 实验
4.3.4 质谱检测结果
4.5 讨论
4.6 本章小结
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
致 谢
河北大学;
