青霉素致猫运动区急性局灶性癫痫模型制作及其发作机制研究

摘要

目的：癫痫是由各种原因引起的脑功能障碍综合征，即脑细胞群异常放电所致的发作性、暂时性的脑功能紊乱，具有反复性、阵发性、发作性等特点。当痫灶涉及功能区时，可出现运动、感觉、视觉、听觉、语言等方面的功能障碍，甚至伴有行为、意识及自主神经功能障碍。由于其发作没有预见性，发作的程度也不能人为控制，治疗较为困难。自从1883年Openchowski shouci首次采用冷冻大脑组织造成脑内致痫灶起，癫痫的实验性研究已有100多年。从果蝇到灵长类，癫痫的动物模型也是多种多样，数目繁多。尽管癫痫动物模型种类繁多，并且在癫痫实验研究中起着非常关键性作用，但造成癫痫的遗传和获得性因素十分复杂，远非任何一种动物模型所能代表。另外，目前国内外研究的急性或慢性癫痫模型多局限于颞叶及海马，对于运动区的研究由于许多因素的影响还较少见。针对上述情况，本实验采用猫作为实验动物，拟通过青霉素这种药物建立确切、稳定的运动区癫痫模型，就该模型制作、术中麻醉剂应用剂量、致痫青霉素剂量、癫痫发作情况、相应脑电图、行为学及病理学变化进行观察，探讨其发病机理，为运动区癫痫的实验研究与临床治疗提供帮助。 方法： 1 采用正常成年家猫建立青霉素急性局限性点燃型运动区癫痫模型。取健康家猫15只，随机分为两组，其中致痫组12只，运动区皮层注射1万单位青霉素；对照组3只，运动区皮层注射生理盐水。 2 应用MS4000U生物信号定量记录分析系统分别于致痫即刻、1小时、3小时、1天、3天、6天记录致痫组动物脑电图变化并与正常组比较。 3 观察致痫组动物相应的行为学改变。 4 使用分光光度法检测两组动物脑组织内氨基酸类神经递质含量，进行统计学分析。 5 分别对对照组及致痫组(致痫即刻、1小时、3小时、1天、3天、6天)猫脑组织进行HE及免疫组化染色，使用光学显微镜和HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统对石蜡切片进行病理学观察，进行统计学分析。 6 使用SPSS10.5软件进行统计学分析。 结果： 1．通过对家猫麻醉时间、深度、及致痫情况研究，发现异丙酚持续静脉微量泵泵入麻醉(3～7μg/kg.min)效果较好、苏醒快且此剂量足以达到镇静效果而不影响试验动物的脑电图棘慢波的描记，可顺利完成所有手术操作及脑电图记录。 2．青霉素致痫以1万单位皮层内约1mm注入可出现痫样放电；当剂量大于1万单位动物出现癫痫持续阵挛发作且不易存活；当剂量小于1万单位诱发不出癫痫波且无症状；所以在实验中选择10，000单位作为注射剂量，这样有充足的时间观察手术后癫痫发作情况及行为学的变化。 3．脑电监测显示：青霉素1万单位注射至皮层下1mm所致动物模型为急性局限性癫痫模型，青霉素1万单位致痫持续时间为3.37～5.02天。 4．青霉素皮层注射可以导致脑组织内氨基酸类神经递质含量改变，即兴奋性氨基酸GLU增多，抑制性氨基酸γ-GABA减少，从而出现痫样放电。 结论： 1．青霉素作为一种急性、快速致痫剂，通过局部皮层给药，所建立的猫急性局灶性癫痫模型稳定、确切，动物电生理学观察表现为局部导联和全导的棘波、棘慢波； 2．异丙酚持续静脉微量泵泵入麻醉(3-7 μg/kg．min)效果较好、苏醒快且此剂量足以达到镇静效果而不影响试验动物的脑电图棘慢波的描记，可顺利完成所有手术操作及脑电图记录。 3．行为学改变：致痫动物3天内精神萎靡，摄食较差，活动少，伴有或不伴有对侧肢体的阵挛，3～4天后恢复正常。 4．痫样放电系指脑电图记录到的不同于背景活动的波或复合波，对诊断起重要作用。本实验动物模型脑电出现棘波及棘慢复合波，持续3.38～5.01天，说明脑组织存在痫样放电。 5．氨基酸类神经递质的平衡紊乱是癫痫发生的重要病理基础。本实验检测兴奋性氨基酸(谷氨酸GLU)和抑制性氨基酸(γ-氨基丁酸γ-GABA)含量及其比值，发现兴奋性氨基酸(谷氨酸GLU)含量增多，抑制性氨基酸(γ-氨基丁酸γ-GABA)含量减少，本模型上述氨基酸含量与正常组比较有显著差别，故青霉素致痫与氨基酸类神经递质的平衡紊乱有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：癫痫发病机制新进展

致谢

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