人脐源性胰岛前体细胞移植治疗1型糖尿病的实验研究

摘要

目的:　　评价hUMSCs在体外诱导为胰岛前体细胞后治疗T1D大鼠的效果。　　方法:　　1.分离、培养及鉴定hUMSCs；2.取第4代hUMSCs采用分阶段联合诱导方法诱导并观察诱导后细胞形态变化；3.分别取诱导后第7d、14d和21d细胞进行免疫荧光技术检测Ngn3、胰岛素和MafA表达；Western-blot法检测诱导后第7d、14d和21d细胞MafA和Glut2蛋白表达；4.选择正常雄性SD大鼠44只，随机分为诱导细胞组、干细胞组、模型组和正常组，正常组给予生理盐水，余均给予链脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型；5.将经CM-DIL标记的胰岛前体细胞移植到糖尿病大鼠胰腺被膜下，实验周期为60天，分为2W、4W、6W、8W四个时间段，观察各组血糖和体重变化情况；HE染色观察大鼠胰岛形态；Western-blot法检测各时期各组MafA表达改变；分析移植后MafA和大鼠血糖相关性；分析MafA在干细胞组和诱导细胞组之间的表达差异性。　　结果:　　1.成功分离培养出hUMSCs，诱导后细胞形态宽大、出现集落；2.免疫荧光技术检测Ngn3、胰岛素和MafA蛋白均为阳性表达；Western-blot检测诱导后细胞MafA在正常组和7d时几乎无表达，14d和21d组稍增高，Glut2在7d增高，14d时达高峰，21天时稍弱；3.共有38只大鼠成模，实验组大鼠血糖于第7天时升高；细胞移植后，干细胞组和诱导细胞组血糖均不同程度下降，但诱导细胞组降低更明显，模型组仍维持在高血糖状态；模型组体重在整个实验过程中呈现持续降低，诱导细胞组和干细胞组体重均在第4周后呈升高趋势；4. Western-blot法显示移植后各组均能检测到MafA表达且均呈升高趋势，干细胞组在第6W时明显升高，诱导细胞组在第4W时明显升高；移植后MafA和血糖相关性两组均呈负性相关；MafA在干细胞组和诱导细胞组之间的表达无差异性。　　结论:　　人脐带间充质干细胞在微环境下诱导可诱导分化为胰岛前体细胞，干细胞和胰岛前体细胞移植后对T1D鼠有降血糖和升高体重的作用。

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英文缩略词表

0 引言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2. 结果

2.1 hUMSCs分离和培养

2.2 hUMSCs表面标记分子鉴定

2.3 诱导后细胞形态变化

2.4 免疫荧光细胞化学检测诱导后细胞相关因子蛋白

2.5 Western-blot法检测诱导细胞相关蛋白表达

2.6 CM-DIL细胞标记及移植前后：

2.7 细胞移植后一般情况观察及血糖和体重变化

2.8 各组胰腺形态表现

2.9 Western-blot检测移植后各组各时期MafA表达

2.10 移植后相关分析

3. 讨论

4. 结论

参考文献

综述：Pdx-1、Ngn3及MafA的作用讨论

作者简历：

致谢

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