细菌GYZC02株抗血栓活性成分研究

摘要

血栓性疾病严重危害人们的健康和生命，已成为人类疾病死亡的主要原因。发现新的抗血栓药物，对预防和治疗血栓性疾病具有重要意义。微生物是抗血栓药物的重要来源之一。　　本文通过猪血粉平板初筛，摇瓶复筛，从贵阳市周边的土壤中分离筛选到一株具有抗血栓活性的菌株GYZC02。通过生理生化试验和16S rDNA基因序列分析对GYZC02菌株进行了鉴定，结果显示GYZC02菌株的大部分特征与枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)基本一致，将该菌16S rDNA序列与NCBI网站数据库进行同源性比对，利用MEGA5.0绘制系统发育进化树，相似度表明菌株GYZC02与Bacillus subtilis BL10的16S rDNA序列同源性达到100％，结合生理生化试验和16S rDNA基因序列分析结果，菌株GYZC02被鉴定为枯草芽孢杆菌。　　采取单因素试验对菌株GYZC02进行液体发酵条件优化，优化后最佳培养基成分是：可溶性淀粉1.5%，酵母膏0.7%，KH2PO40.3%，Na2HPO40.2%， CaCl20.02%，MgSO40.03%，FeSO40.04%；最佳发酵工艺条件是：发酵温度37℃，初始pH7.0，接种量4%，装液量75 mL/250 ml，摇床速度170 r/min，接种龄12h，发酵时间48h。此时抗血栓活性物的活力最高。　　通过乙酸乙酯萃取和酸沉淀法分离提取得到抗栓活性物质粗品，将该物质进行体外抗血栓、小鼠体内抗血栓试验和抗血小板凝集试验，结果发现：GYZC02菌株的活性物质能延长小鼠断尾出血时间，具有抗凝活性，能阻断小鼠尾动脉血栓形成，表明具有体内抗血栓形成的活性；GYZC02菌株活性物质体外对人工血栓有一定的溶解作用；抑制血小板聚集是其抗血栓活性的作用机制。　　通过薄层层析分析和红外光谱分析，初步确定该物质为糖环肽类物质。这类物质抗血栓活性鲜见报道，因此，GYZC02菌株糖环肽类物质具有开发成新型抗血栓药物的潜质。

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第一章 绪论

1.1 血栓的危害和形成机制

1.2 抗血栓药物的研究现状

1.3 微生物抗血栓的研究进展

1.4 论文的研究内容、技术路线和课题来源

第二章 具有抗血栓活性细菌的筛选

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨论与分析

2.5 小结

第三章 细菌GYZC02株的鉴定

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 GYZC02株培养条件的优化

4.1 实验材料

4.2 方法

4.3 结果与讨论

4.4 小结

第五章 GYZC02株抗血栓活性成分的研究

5.1 GYZC02株抗血栓成分的分离方法

5.2 GYZC02株抗血栓活性体外抗血栓试验

5.3 GYZC02株抗血栓活性成分体内试验

5.4 GYZC02株抗血栓成分的化学鉴定、验证和作用机制研究

第六章论文的创新点和后续研究建议

6.1 论文的创新点

6.2 后续研究建议

参考文献

致谢

附录一

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