PAS--Na对染锰SD大鼠胰腺损伤的干预研究

摘要

目的：　　探讨不同染锰浓度对SD大鼠胰腺损伤的影响以及对氨基水杨酸钠(PAS-Na)的治疗效果，初步研究锰诱导胰腺毒性影响以及PAS-Na的干预作用。　　方法：　　120只SD雄性大鼠适应性饲养一周后，以体重为参考依据随机分为锰染毒和PAS-Na治疗模型:①建立锰染毒模型（8周染锰大鼠组）:48只大鼠随机分为正常对照、低、中、高剂量染锰组，每组12只。低、中、高剂量染锰组分别腹腔注射(ip)MnCl2·4H2O溶液(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)，对照组ip等容量生理盐水，每日1次，每周5次，连续8周;②建立PAS-Na干预模型（14周PAS-Na干预组）:72只大鼠随机分为正常对照组、染锰组、低、中、高剂量PAS-Na治疗组以及PAS-Na对照组，每组12只。染锰组、低、中、高剂量PAS-Na治疗组分别ip MnCl2·4H2O溶液20mg/kg，对照组和PAS-Na对照组分别ip等容量生理盐水，每日1次，每周5次，持续8周。然后，低、中、高剂量PAS-Na治疗组和PAS-Na对照组分别皮下注射(sc)PAS-Na溶液(100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、300mg/kg)，对照组和染锰组分别Sc等容量生理盐水，每日1次，每周5次，持续6周。实验观察指标:①生长发育指标:每周固定时间给大鼠称重一次;染锰或PAS-Na干预结束后，麻醉处死大鼠，迅速解剖取心、肝、脾、肺、肾、睾丸等脏器，称重后计算脏器系数;②石墨炉原子吸收光谱法测定大鼠全血锰含量;③病理切片观察锰致胰腺的损伤程度及PAS-Na的治疗效果;④大鼠血清、胰腺组织炎症因子及糖代谢相关指标测定;⑤电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测肝和胰腺钙、镁、锰、铁、铜、锌、硒含量变化情况;⑥将8周染锰大鼠组血锰浓度合并后分别与胰腺、肝金属浓度进行pearson相关性分析。　　结果：　　(1)8周染锰大鼠组，从第2周至第8周，随着时间增加各组大鼠体重均逐渐增长，但与正常对照组相比较，低、中、高剂量染锰组体重增长缓慢，差异有统计性（P＜0.05或P＜0.01)。14周PAS-Na干预组，第9、10周（治疗第1、2周）染锰组体重明显轻于对照组(P＜0.05或P＜0.01)。(2)8周染锰大鼠组，与对照组比较，高剂量染锰组肝、肾系数增高，差异有统计学意义(P＜0.01)。(3)8周染锰大鼠组，低、中、高剂量染锰组较对照组大鼠全血锰含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01)，且随着染锰剂量的增加，血锰浓度升高。14周PAS-Na干预组，与对照组相比，染锰组大鼠血锰含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01);与染锰组比较，低、中、高剂量PAS-Na治疗组血锰含量明显降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。(4)8周染锰大鼠组，在光学电子显微镜下可观察到正常对照组胰岛、腺泡细胞结构清晰，排列整齐，分布均匀，无间质性水肿，无炎性细胞浸润，胞浆呈浅粉色，胞核呈深蓝色;低剂量染锰组腺体相对完整，腺泡细胞水肿，间质疏松;中剂量染锰组腺泡细胞水肿明显，少量腺泡细胞出现空泡样变性或脂肪变性，失去正常形态;高剂量染锰组胰腺组织呈大片凝固性坏死，大量炎症细胞浸润，间质疏松，小叶结构被破坏，界限模糊不清，腺泡细胞大量萎缩、坏死，细胞轮廓消失，可见核固缩、碎裂及溶解，胰岛水肿明显，但胰岛细胞结构相对完整。(5)8周染锰大鼠组，与对照组比较，低、中、高剂量染锰组血清淀粉酶、血清脂肪酶含量下降，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01)，低剂量染锰组胰腺组织淀粉酶、IL-1β、TNF-α含量上升，有统计学差异（P＜0.05)。14周PAS-Na干预组，与对照组比较，染锰组血清淀粉酶、脂肪酶含量上升，具有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01);与染锰组比较，低、中、高PAS-Na治疗组血清淀粉酶及血清脂肪酶含量下降，差异具有统计学意义（P＜0.01)。(6)8周染锰大鼠组，与对照组比较，中、高剂量染锰组胰腺组织镁、锌含量下降，有统计学差异，低、中、高剂量染锰组锰含量升高，中、高剂量染锰组铁含量上升，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。14周PAS-Na干预组，与对照组比较，染锰组锌含量明显下降，有统计学意义（P＜0.05）;与染锰组比较，低剂量PAS-Na治疗组锰含量有所下降，具有统计学差异（P＜0.05)。(7)8周染锰大鼠组，与对照组比较，高剂量染锰组肝脏钙、锰含量有所升高，具有统计学差异（P＜0.05)，低、中、高剂量染锰组锌含量升高，有统计学意义（P＜0.01）。14周PAS-Na干预组，与对照组比较，染锰组锰含量升高，具有统计学差异（P＜0.05）。(8)8周染锰大鼠血锰含量与胰腺、肝金属浓度相关性:血锰浓度与胰腺锰(r=0.635，P＜0.01)、肝脏锰(r=0.613，P＜0.05)呈正相关，与胰腺镁（r=-0.469，P＜0.05）、锌（r=-0.585，P＜0.05）呈负相关。胰腺镁含量与锰(r=-0.596，P＜0.01)、铁(r=-0.456，P＜0.05)呈负相关，与锌(r=0.569，P＜0.05)、硒(r=0.468，P＜0.05)呈正相关;胰腺锰含量与铁（r=0.658，P＜0.01）呈正相关，与锌(r=-0.620，P＜0.01）呈负相关，胰腺铁含量与硒(r=-0.533，P＜0.05)呈负相关。肝脏镁含量与铜含量(r=0.587，P＜0.05)呈正相关。　　结论：　　(1)染锰可引起大鼠体重减轻，肝、肾系数增加。(2)染锰可使大鼠血锰浓度增加，血锰含量增加程度与染锰剂量、染毒时间有关。PAS-Na干预可降低血锰含量，提示PAS-Na促排锰效果较显著。(3)染锰可损害大鼠胰腺组织，影响胰腺正常分泌功能，胰腺受损伤程度与染毒剂量、时间有关。(4)PAS-Na治疗可能对过量锰导致胰腺分泌功能失调有一定的改善作用。(5)锰可在胰腺蓄积，引起铁含量上升，锌、镁含量下降;锰可在肝脏蓄积，引起钙、锌含量上升。(6)相关性分析显示，染锰引起大鼠胰腺、肝脏部分金属紊乱，可能影响体内正常生理代谢过程。

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摘要

前言

1材料与方法

1．1主要仪器、试剂和溶液配制方法

1．2实验动物及分组方法

1．3实验动物样本处理方法

1．4实验动物指标测定

2统计学处理与数据分析

3结果

3．1 PAS-Na对染锰SD大鼠生长发育的影响

3．2 PAS-Na对染锰SD大鼠血锰浓度变化的影响

3．3光镜下大鼠胰腺病理形态学改变

3．4大鼠血清、胰腺组织炎症因子及糖代谢指标测定情况

3．5大鼠胰腺组织钙、镁、锰、铁、铜、锌、硒含量变化

3．6大鼠肝脏组织钙、镁、锰、铁、铜、锌、硒含量变化

3．7染锰大鼠血锰浓度与胰腺、肝脏金属浓度相关性分析

4讨论

4．1 PAS-Na对染锰SD大鼠生长发育的影响

4．2 PAS-Na对染锰SD大鼠血锰含量的影响

4．3光镜下大鼠胰腺组织病理形态学改变情况

4．4大鼠血清、胰腺组织炎症因子及糖代谢指标测定情况

4．5大鼠胰腺组织钙、镁、锰、铁、铜、锌、硒含量变化

4．6大鼠肝脏组织钙、镁、锰、铁、铜、锌、硒含量变化

4．7染锰大鼠血锰浓度与胰腺、肝脏金属浓度相关性分析

5结论

参考文献

综述 锰、铁、铝暴露对胰腺的毒性影响

致谢

攻读学位期间发表的论文