加味六味地黄汤对UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路调控FGF-23的影响

摘要

目的：　　本研究以Wnt4/β-链蛋白（Beta-catenin,β-catenin）信号通路调控成纤维细胞生长因子-23（Fibroblast growth factor-23, FGF-23）为切入点，通过单侧输尿管结扎（Unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠模型，旨在探索UUO大鼠模型是否存在肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的活化，继而调控FGF-23的表达，参与肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)的发生发展。加味六味地黄汤抗RIF作用机制是否与阻断Wnt4/β-catenin信号通路调控活化，继而影响FGF-23的表达有关。　　方法：　　采用75只清洁级SD雄性大鼠，按照体重随机分为五组：正常组（n=15）、假手术组（n=15）、模型组（n=15）、中药组（n=15）、缬沙坦组（n=15）。各组组内再随机分为7天、14天、28天3个时间点，每个时间点处死5只大鼠，正常组在实验完成时一次性处死。正常组和假手术组每日予以生理盐水(2ml/只/d)灌胃；中药组在造模后给予制备的加味六味地黄汤药液(2ml/只/d)灌胃；缬沙坦组在造模后给予缬沙坦(30mg/kg/d)灌胃。留取各组大鼠左肾备检。肾组织行HE染色、Masson染色，光学显微镜下观察肾脏病理改变并进行半定量计分；免疫组织化学法和Western blot检测肾组织Wnt4、β-catenin和FGF-23蛋白的表达。　　结果：　　1、病理结果显示，正常组和假手术组大鼠肾小球、肾小管及间质均正常，而模型组大鼠肾组织第7天出现小管萎缩、间质纤维化、间质炎症细胞浸润等病理改变，随梗阻时间延长，病变逐渐加重，并于第14天达高峰；经加味六味地黄汤和缬沙坦干预后小管萎缩、间质纤维化、间质炎症细胞浸润等均有所改善。半定量计分结果显示，与假手术组第7天、第14天和28天相同时间点的半定量计分相比较，模型组大鼠各时间点均增高，差异均有统计学意义（p＜0.01）。而中药组和缬沙坦组第7天、第14天和28天大鼠半定量计分均有所下降，与模型组相同时间点比较，差异均有统计学意义（p＜0.01）。　　2、免疫组织化学法结果显示，假手术组大鼠肾小管和间质均可见少量的Wnt4、β-catenin和FGF-23阳性蛋白的表达，而模型组肾小管和间质第7天即可见Wnt4、β-catenin和FGF-23阳性蛋白染色增多，14天达高峰；而经加味六味地黄汤及缬沙坦处理后，小管和间质第7天即可见Wnt4、β-catenin和FGF-23阳性蛋白染色减轻。Western blot结果显示，假手术组相比，模型组大鼠第7天、第14天和28天大鼠肾组织Wnt4、β-catenin和FGF-23蛋白表达均上调，差异均有统计学意义（p＜0.01）。而中药组和缬沙坦组大鼠第7天、第14天和28天大鼠肾组织Wnt4、β-catenin和FGF-23蛋白表达均下调，与模型组相同时间点比较，差异均有统计学意义（p＜0.01）。　　结论：　　1、加味六味地黄汤可降低UUO大鼠血清BUN、Scr，改善肾间质纤维化病变，提示加味六味地黄汤有抗肾间质纤维化的作用；　　2、UUO大鼠肾组织Wnt4、β-catenin和FGF-23蛋白上调，提示Wnt4/β-catenin信号通路活化并介导FGF-23可能参与肾间质纤维化过程；　　3、加味六味地黄汤可下调UUO大鼠模型FGF-23、Wnt4、β-catenin蛋白的表达，提示其抗肾间质纤维化的机制可能与抑制Wnt4/β-catenin信号通路活化，抑制FGF-23表达有关。

目录

声明

引言

1.实验材料及方法

1.1实验动物

1.2 实验场所

1.3主要试剂与配制

1.4 实验主要仪器（由广西中医药大学附属瑞康医院提供）

2.实验方法及步骤

2.1 实验分组