G-CSF诱导小鼠造血干细胞动员过程中成骨细胞及破骨细胞的变化

摘要

目的:造血干细胞(HSC)目前被广泛用于移植治疗恶性血液系统疾病，采集足够量的造血干细胞是移植治疗成功的关键前提，近年研究明确，骨髓微环境中存在着两种以上的骨髓龛，其中骨内膜龛对维持造血干细胞的稳定静止起着重要作用，而成骨细胞是骨内膜龛的重要组成部分，大量实验表明，G-CSF动员后成骨细胞数量减少，功能减低，破骨细胞作为与成骨细胞相反作用的细胞，在动员过程中发生什么变化，值得我们去研究，本研究以小鼠为研究对象，观察G-CSF动员对小鼠成骨、破骨细胞的影响，以及通过PTH诱导激活破骨细胞，观察对造血干细胞动员的影响。　　方法:利用流式细胞计数检测动员O、3、5天小鼠外周血干细胞比例，观察G-CSF诱导动员的情况，通过实时定量-多聚酶链式反应(RQ-PCR)检测动员前后骨髓细胞骨钙素(OCN)、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达，免疫组织化学检测骨髓OCN（成骨细胞特异性表达）阳性细胞的数量来比较动员前后成骨细胞的数量和功能上的变化，ELISA法检测小鼠周血TRACP-5b的浓度反应破骨细胞活性，抗酒石酸磷酸酶（TRAP）染色检测小鼠股骨中破骨细胞数量，评价G-CSF动员对成骨、破骨细胞的影响。大剂量PTH(甲状旁腺素)激活破骨细胞，观察激活破骨细胞后能否产生HSC动员效应。　　结果:　　1.骨髓SDF-1和OCN表达减少，提示成骨细胞功能降低;MMP9表达增高，提示中性粒细胞释放MMP9，骨髓基质发生蛋白水解。　　2.显微镜下观察动员后骨髓成骨细胞数量减少，形态由原来卵圆形变为梭形至扁平消失。　　3.小鼠外周血TRACP-5b增多，0天（4.43±0.52IU/L）、5天（10.49±1.75mIU/mL），提示破骨细胞活性增高;TRAP染色提示注射G-CSF后破骨细胞数量增多。　　4.大剂量PTH激活破骨细胞能够产生HSC动员效应。　　结论:G-CSF动员后成骨细胞数量及活性降低，导致SDF-1趋化能力减弱，破坏造血干细胞静止状态引发动员;破骨细胞激活后可能与成骨细胞相互作用影响动员发生。

目录

声明

个人简历

英文缩写词及中文对照

摘要

前言

一．材料

二．实验对象及分组

三．标本采集

四．流式细胞术检测收集的小鼠外周血的LSK细胞比例

六．免疫组织化学检测骨髓OCN的表达

七．抗酒石酸磷酸酶化学染色

八．实时定量-多聚酶链式反应(RQ-PCR)检测动员前后骨髓OCN、SDF-1和MMP9的mRNA表达

结果

讨论

小结

参考文献

综述 成骨细胞与破骨细胞在造血干细胞动员中作用的研究进展

致谢