黄连素对人大肠癌耐长春新碱细胞株多药耐药的研究

摘要

目的:探讨黄连素对人结肠癌细胞HCT-8及人结肠癌耐长春新碱细胞HCT-8/VCR的细胞生物学作用和可能的耐药逆转作用。　　方法:采用浓度梯度递增法作用耐药细胞株,直至耐药细胞HCT-8/VCR可以长期在浓度为1.25μg/ml的长春新碱的培养基中稳定生长。体外细胞毒性实验观察亲本细胞株HCT-8和耐药株HCT-8/VCR对长春新碱、奥沙利铂、伊立替康及氟尿嘧啶的敏感性,确定 HCT-8/VCR的多药耐药性。比较HCT-8和HCT-8/VCR细胞在细胞形态、生长曲线及倍增时间的差别。MTT法检测黄连素对HCT-8/VCR细胞多药耐药的作用。流式细胞仪检测HCT-8细胞、HCT-8/VCR细胞及黄连素作用后的耐药细胞的细胞周期。　　结果:(1)HCT-8/VCR细胞经过长期不同浓度的长春新碱诱导后可在含浓度为1.25μg/mL的VCR的培养基中稳定增殖,而HCT-8细胞在低浓度250ng/ml的VCR中就大片死亡,很难继续生长。(2)以HCT-8细胞为对照组,HCT-8/VCR细胞为实验组,分别加入不同浓度的化疗药,实验检测出 HCT-8/VCR细胞株对长春新碱的耐药指数为16.23,并发现HCT-8/VCR细胞对奥沙利铂、伊立替康及氟尿嘧啶的耐药指数分别为7.29、5.59及4.32,产生交叉耐药,证实HCT-8/VCR细胞存在多药耐药性。(3)耐药细胞HCT-8/VCR增殖速度明显低于亲本细胞HCT-8,细胞耐药后HCT-8/VCR细胞的生长增殖速度减慢,其群体倍增时间较亲本HCT-8细胞延长了27.6007小时。耐药细胞株与亲本细胞HCT-8相比,贴壁较紧,消化时间时间延长,显微镜镜下观察,HCT-8/VCR胞体积较HCT-8大,细胞核不规则,可见双核、多形核,细胞形态不规则,呈多角形、细长形改变,可见巨核细胞。(4)根据MTT检测的实验结果和中效方程式计算黄连素作用HCT-8及HCT-8/VCR细胞的IC50值,两组细胞的IC50值(P>0.05),说明黄连素对HCT-8和HCT-8/VCR细胞的增殖抑制作用在浓度方面无显著性差异,HCT-8/VCR细胞对黄连素无交叉耐药性。经黄连素作用后的黄连素-HCT-8/VCR细胞对化疗药物的耐药性均出现不同程度发生逆转,对VCR的耐药逆转指数最高,为1.8,对奥沙利铂、伊立替康及5-FU的逆转指数为1.4、1.3和0.8。说明黄连素作用后的黄连素-HCT-8/VCR细胞对VCR的耐药性发生了部分逆转。(5)与亲本细胞相比,耐药细胞的GO/G1期所占比例减少,G2/M期所占比例增加;黄连素作用后的耐药细胞与耐药细胞比较, GO/G1期所占比例增加,G2/M期所占比例减少。　　结论:(1)人结肠癌耐长春新碱细胞株 HCT-8/VCR,对奥沙利铂、伊立替康及5-FU产生交叉耐药,证实该细胞株是大肠癌MDR的理想模型。(2)黄连素在体外具有抑制人结肠癌细胞HCT-8及其耐药细胞HCT-8/VCR增殖的作用,这种作用具有剂量依赖性。(3)黄连素可以增强长春新碱、奥沙利铂、伊立替康及5-FU对HCT-8/VCR细胞的毒性。(4)黄连素具有部分逆转HCT-8/VCR的耐药作用。

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引言

正文

1 实验材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2 实验结果

2.1细胞形态学观察

2.2人结肠癌耐长春新碱HCT-8/VCR细胞具有多药耐药性

2.3细胞生长曲线和细胞群体倍增时间

2.4黄连素对HCT-8和HCT-8/VCR细胞的增殖抑制作用和作用HCT-8/VCR细胞最佳浓度选择

2.5细胞周期分布

2.6黄连素对HCT-8/VCR耐药细胞株的多药耐药作用

3 讨论

3.1肿瘤多药耐药的机制简述

3.2化学药物及生物治疗逆转耐药的机制及相关局限性

3.3大肠癌的中医辨证分型

3.4 中药逆转大肠癌多药耐药的研究

3.5黄连素抗肿瘤作用及逆转肿瘤耐药的相关研究

3.6本实验结果相关分析

结论

参考文献

缩 略 词 表

综述

参考文献

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果