鲤春病毒血症病毒（SVCV）糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的评估

摘要

鲤春病毒血症病毒(Spring viremia ofcarp virus，SVCV)是一种能够引起鲤科鱼类急性传染病的病原，属弹状病毒科，囊膜来自宿主细胞，很难制备高效价的抗血清，一旦暴发就会造成巨大的经济损失。SVCV糖蛋白基因全长1530bp，编码509个氨基酸，推算未糖基化的蛋白前体的分子量为57.4 kD，等电点为5.529。SVCV G蛋白是典型的跨膜糖蛋白，它形成三聚体的长钉状，位于病毒表面，与细胞上的受体结合介导病毒的内吞作用，是决定病毒血清学特征的主要抗原。 由于信号肽毒性和跨膜区的存在，在Escherachia coli中表达弹状病毒糖蛋白的全长是非常困难的。本文选取了SVCV G蛋白基因N端去信号肽的约1000br,进行原核表达，克隆到表达载体pET32a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达出带6×His标签的重组蛋白，大小与预期分子量一致。将此蛋白免疫BALB/cA小鼠制备了多克隆抗血清，为后续的研究工作打下了基础。 DNA疫苗能同时诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答，在多种感染性疾病的防治中己显示出其他形式疫苗无法比拟的优势。本文构建了SVCV糖蛋白基因的四种DNA疫苗，肌肉注射后研究它们诱导的保护作用。DNA疫苗免疫接种实验分成四组，第一组接种的重组质粒DNA编码全长的糖蛋白；第二组接种的重组质粒DNA编码去C端信号肽的糖蛋白；第三组接种的重组质粒DNA编码去N端跨膜区的糖蛋白；第四组接种的重组质粒DNA编码同时去C端信号肽和N端跨膜区的糖蛋白。质粒纯化后每尾鱼肌肉注射0.5μg质粒DNA，接种7天后攻毒。以注射pcDNA 3.0的免疫组作为对照，第一至第四组的相对保护率分别是14.47﹪、22.22﹪、17.32﹪、17.32﹪，实验组明显高于pcDNA3.0组和PBS组，差异具有统计学意义(P<0.05)，而SVCV G蛋白全长及各片段诱导的免疫保护作用并无显著性(P>0.05)。第一组在免疫后第四天才出现死亡现象，提示有较好的保护作用。但与其它弹状病毒糖蛋白诱导的保护作用相比，免疫效果不够理想，推测与病毒接种量过大及伴生性感染等有关。对于SVCV G蛋白不同片段保护效果还需要进一步的评估。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

第一章前言

1.1鲤春病毒血症病毒(SVCV)的研究进展

1.2鱼类DNA疫苗研究进展

1.3本论文研究的目的、意义

1.4创新点

1.5展望

第二章SVCV G蛋白全长基因的克隆及生物信息学分析

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3讨论

2.4小结

第三章SVCV G基因的原核表达及抗体制备

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3 讨论

3.4小结

第四章SVCV G基因DNA疫苗的构建

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3 讨论

4.4小结

第五章SVCV DNA疫苗免疫效果的评估

5.1材料与方法

5.2结果与分析

5.3 讨论

5.4 小结

全文总结及今后工作展望

参考文献

致谢

原创性声明