大鼠抑郁症模型肠道菌群的区系变化及柴胡疏肝散的干预效果观察

摘要

本试验通过观察柴胡疏肝散对慢性不可预知温和应激（Chronic Unpredictable Mild Stress, CUMS）抑郁症模型大鼠行为学、肠道菌群的影响，探讨柴胡疏肝散抗抑郁的疗效机制。　　将60只SD大鼠按照随机数字表分为空白对照组10只、造模组50只，造模组大鼠采用CUMS建立抑郁症模型。剔除造模不符合要求大鼠10只，余下大鼠随机分4组，每组10只；模型对照组不予治疗，帕罗西汀组灌服帕罗西汀，中西药结合组灌服帕罗西汀和柴胡疏肝散，柴胡疏肝散组灌服柴胡疏肝散，干预治疗2周。试验期间，定期记录大鼠体重变化，采用旷场实验、悬尾实验、糖水消耗实验观察大鼠行为学变化。试验结束后，采集各组大鼠粪便、肝、结肠组织。采用Illumina MiSeq技术检测大鼠肠道菌群，镜下观察肝、结肠形态结构。结果显示：　　1.与空白对照组比较，模型对照组大鼠体重增长缓慢，旷场中央区域停留时间显著缩短，悬尾不动时间显著增加；拟杆菌门绝对丰度显著减少，厚壁菌门显著增加，变形菌门减少，放线菌门增加，蓝菌门无显著差异；棒状杆菌科、消化链球菌科显著增加，韦荣氏菌科显著减少；　　2.与模型组比较，柴胡疏肝散组大鼠体重增长速率、旷场中央区域停留时间、悬尾不动时间有显著差异，帕罗西汀组、中西药结合组大鼠体重增长速率、悬尾不动时间有显著差异。与空白对照组比较，柴胡疏肝散组大鼠旷场中央区域停留时间、悬尾不动时间无显著差异。干预治疗组间两两比较，体重增长速率、旷场中央区域停留时间、悬尾不动时间均无显著差异；　　3.与模型组菌群绝对丰度比较，柴胡疏肝散组拟杆菌门、变形菌门、放线菌门增加，厚壁菌门减少，蓝菌门显著增加，棒状杆菌科显著减少，韦荣氏菌科增加，消化链球菌科减少；帕罗西汀组拟杆菌门、厚壁菌门、蓝菌门减少，变形菌门、放线菌门增加，棒状杆菌科显著减少，韦荣氏菌科、消化链球菌科减少；中西药结合组拟杆菌门、放线菌门增加，厚壁菌门、变形菌门、蓝菌门减少，棒状杆菌科、韦荣氏菌科减少，消化链球菌科显著减少。干预治疗组间两两比较，柴胡疏肝散组蓝菌门绝对丰度比帕罗西汀组、中西药结合组显著增加，其余门、科菌群绝对丰度无显著差异；　　4.与空白对照组比较，模型对照组大鼠肝窦内皮轻微增生，柴胡疏肝散组、中西药结合组无明显组织学变化，帕罗西汀组肝脏有凝固性坏死灶。各组大鼠的结肠形态结构没有明显组织学变化。　　试验结果表明：CUMS能成功建立抑郁症大鼠模型；柴胡疏肝散可有效改善模型大鼠的抑郁症状，疗效与帕罗西汀、中西药结合相当；抑郁症的产生可能与肠道拟杆菌、厚壁菌、变形菌、放线菌、棒状杆菌、消化链球菌、韦荣氏菌等菌群失调密切相关，柴胡疏肝散可通过调控肠道益生菌与有害菌群的丰度发挥抗抑郁症作用；帕罗西汀对抑郁症模型大鼠肠道菌群微生态、肝脏组织均有破坏作用。

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1 引言

1.1 文献研究

1.1.1 抑郁症的中医病因病机

1.1.2 抑郁症发病机制

1.1.3 柴胡疏肝散抗抑郁机制

1.1.4 肠道菌群与抑郁症发病

1.1.5 肠道菌群检测技术进展

1.1.6 抑郁症大鼠的造模方法

1.2 研究目的、意义及内容

1.2.1 研究目的意义

1.2.2 研究内容

2.1 试验材料

2.1.2 主要仪器和设备

2.1.3 试验药品与试剂

2.2 试验方法

2.2.2 各组大鼠干预方案

2.2.3 标本的采集与保存

2.3 观察指标

2.3.1 大鼠行为学

2.3.2 肠道菌群结构分析

2.3.3 肝脏、结肠组织病理切片

2.3.4 血清生化指标

2.4 数据统计

3.1 大鼠行为学

3.1.1 体重监测

3.1.2 糖水偏好实验

3.1.3 旷场实验

3.1.4 悬尾实验

3.2 肠道菌群DNA测序结果分析

3.2.1 序列长度分布

3.2.2 OTU划分和分类地位鉴定

3.2.3 Alpha多样性分析

3.2.4 Beta多样性分析

3.2.5 分类学组成分析

3.3 肝、结肠组织病理切片结果分析

3.4 血清生化指标结果分析

4.1 由行为学分析造模效果与干预效果

4.2 对肠道菌群的影响

4.3 抑郁症与肝、肠道的关系分析

4.4 抑郁症与血清生化指标变化的关系分析

5 全文总结

致 谢