华南地区猪伪狂犬流行毒株的分离鉴定及YC株gE基因缺失灭活疫苗初步研究

摘要

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒引起的一种高度接触性传染病，可以造成母猪流产、仔猪死亡，给养猪业带来巨大的损失。猪伪狂犬病毒属于A型疱疹病毒亚科猪疱疹病毒?型，基因缺失的弱毒疫苗是目前对该病进行防控的主要手段。本研究拟对华南地区猪群中的猪伪狂犬病毒展开流行病学调查，了解其在猪群中的流行情况，同时分离伪狂犬的流行毒株，筛选出可以在细胞内高滴度增殖的病毒株，制备安全、高效的灭活疫苗，为该病的防控提供有效的手段。　　本研究采集了从 2013～2014 年间华南地区 4 个省份来自 99 个猪场的临床样品（脑、扁桃体、淋巴结和胎衣等），利用建立的PCR检测方法对采集的临床样品进行检测，结果表明所检猪场平均阳性率为29.3%，说明猪伪狂犬在华南地区猪群中广泛流行，感染率较高，这为及时掌握华南地区PRV野毒的流行变异情况提供了依据。　　随后将PCR检测的阳性样品接种至MARC-145细胞进行病毒的分离和鉴定，并通过测序证实成功分离到6株伪狂犬病毒，分别命名为YC、ST、FL、BE、SY和YQ。分别扩增6个毒株gE基因全长序列并进行测序，结果显示gE基因全长为1740 bp，进一步对6个毒株的 gE基因进行遗传进化分析和序列比对，结果表明：6个分离株之间 gE 基因氨基酸同源性为 98.1%～99.8% 。所有分离株位于同一个分支之上，表明分离株之间的进化关系较近，但与早前的欧美毒株则处于不同的分支之上。YC 株对猪的致病性实验结果表明，攻毒后第二天即可引起猪只体温升高；攻毒后第 6 天，攻毒组所有猪只死亡，表明 YC 株对猪呈现高致病性，剖检病理变化包括肺脏出血、脑部充血和出血、肝脏有白色坏死点、扁桃体有化脓性病灶等。　　为了制备猪伪狂犬 gE 基因缺失灭活疫苗，通过与流行毒株的氨基酸序列进行比对，我们选择YC株作为疫苗候选毒株，并敲除其gE基因用于基因缺失灭活疫苗的制备。结果显示，制备的 gE 基因缺失灭活疫苗物理性状稳定，符合灭活苗成品检验的相关要求。免疫攻毒保护实验表明，本研究制备的 gE 基因缺失灭活疫苗免疫猪只两次后可对猪只产生完全保护，为猪伪狂犬的防控提供有效的手段。

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