毕赤酵母高效转录终止序列的筛选与应用评价

目录

英文缩略词表

第一章 绪论

1.1毕赤酵母重组蛋白表达系统简介

1.1.1毕赤酵母的优势及缺陷

1.2毕赤酵母改造的主要策略

1.2.1 CRISPR/Cas9技术

1.2.2蛋白降解途径的优化

1.2.3基因表达盒的优化

1.2.4其他改造策略

1.3转录终止序列研究概述

1.3.1转录终止序列简介

1.3.2转录终止的机制简介

1.3.3转录终止序列的相关研究进展概述

1.3.4转录终止序列预测

1.4本课题的研究意义以及主要研究内容

1.4.1本课题的研究背景研究意义

1.4.2本课题的主要研究内容

第二章 基于核小体占据预测筛选转录终止序列

2.1引言

2.2材料与设备

2.2.1质粒、菌株与引物

2.2.2主要仪器与设备

2.2.3主要试剂

2.2.4培养基与试剂

2.3实验方法

2.3.1终止序列替换质粒的构建

2.3.2重组毕赤酵母的构建

2.3.3重组毕赤酵母EGFP拷贝数的鉴定

2.3.4重组菌株荧光强度测定

2.3.5 SDS-PAGE检测目的蛋白的表达

2.3.6基因转录水平的检测

2.4结果与讨论

2.4.1核小体占据预测

2.4.2终止序列替换毕赤酵母菌株的构建

2.4.3终止序列替换毕赤酵母菌株的96孔板初筛

2.4.4 EGFP拷贝数对荧光蛋白表达量的影响

2.4.5终止序列对EGFP表达量的影响

2.4.6重组毕赤酵母的目的基因转录水平的测定

2.5本章小结

第三章 转录终止序列的应用评价

3.1引言

3.2材料与设备

3.2.1质粒、菌株与引物

3.2.2主要仪器与设备

3.2.3主要试剂

3.2.4培养基与试剂

3.3实验方法

3.3.1终止序列评价质粒的构建

3.3.2重组毕赤酵母菌株的构建

3.3.3重组菌株的发酵与外源蛋白表达检测

3.4结果与讨论

3.4.1终止序列评价毕赤酵母菌株的构建

3.4.2重组酵母菌株外源蛋白表达评价

3.4.3启动子对终止序列表达外源蛋白的影响

3.5本章小结

结论与展望

结论

展望

本论文创新点

参考文献

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢

答辩决议书