慢病毒介导的CRYAB基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖和迁移能力的影响

摘要

目的：　　本研究采用慢病毒介导的RNA干扰技术，通过体外实验研究CRYAB(alphaβ-crystallin，晶状体蛋白αβ)基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖与迁移能力的影响。　　方法：　　1.构建靶向CRYAB基因特异性shRNA慢病毒载体并转染人胃癌细胞SGC-7901细胞株，荧光显微镜观察拍照检测转染效率；　　2.Real-time PCR和Western Blotting方法检测沉默CRYAB基因后CRYAB的mRNA和蛋白质水平；　　3.CCK-8法与细胞克隆球形成实验检测沉默CRYAB基因后细胞的增殖活性；　　4.Transwell迁移实验与细胞划痕实验检测沉默CRYAB基因后细胞的迁移能力。　　结果：　　1.荧光显微镜观察结果显示，感染复数（MOI）值为20的SGC-7901细胞的病毒转染率大于80％；　　2.Real-time PCR与Western Blotting结果显示，成功转染sh RNA-CRYAB胃癌细胞SGC-7901细胞株。慢病毒转染72h后，与sh-ctrl组比较，sh-CRYAB组CRYAB mRNA水平减少90%；与sh-ctrl组比较，sh-CRYAB组CRYAB的蛋白表达显著降低（P<0.001）；　　3.细胞克隆球形成实验显示，SGC7901细胞感染shRNA慢病毒的细胞克隆数明显较感染对照慢病毒组的克隆数少，两组比较具有统计学意义（P<0.05）；　　4.CCK-8检测结果显示，SGC-7901细胞的增殖能力于CRYAB基因沉默之后显著减弱。与sh-ctrl组相比，sh-CRYAB组细胞增长速度变缓，在第4天、第5天增殖能力降低（P<0.05，P<0.01）。　　5.Transwell小室细胞迁移实验结果显示，转染CRYAB shRNA SGC-7901细胞的迁移能力明显下降。sh-CRYAB组平均穿膜细胞数是（49.5±2.0），sh-ctrl组平均穿膜数为（370.0±2.9），两组数据具有统计学差异性（P<0.01）；　　6.细胞划痕实验结果显示，sh-ctrl组划痕基本被迁移的细胞覆盖，sh-CRYAB组的划痕仍比较清楚，测量两组0、24、48、72 h的相对空白面积，sh-CRYAB组细胞相对空白面积在24、48、72 h小于sh-ctrl组（P<0.01）。　　结论：　　shRNA-CRYAB慢病毒干扰载体对抑制CRYAB基因于胃癌细胞SGC-7901中发生机制具有显著作用，进一步使细胞增殖与迁移受到抑制。CRYAB有望成为肿瘤基因治疗的新靶向分子。

目录

声明

英文缩略词表

前言

材料和方法

1. 材料

2. 方法

3. 统计学处理

结果

1. shRNA-CRYAB慢病毒感染SGC-7901细胞的转染效率测定

3.慢病毒转染shRNA-CRYAB 降低 SGC-7901细胞 CRYAB蛋白表达

4. CRYAB表达降低对SGC-7901细胞克隆形成的影响

5. CRYAB表达降低抑制SGC-7901细胞的增殖

6. CRYAB表达降低抑制细胞的迁移能力

讨论

1 RNA干扰技术及应用

2 热休克蛋CRYAB在肿瘤组织中的表达

3 热休克蛋白CRYAB对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响

结论

本研究的局限性

展望

参考文献

在学期间研究成果

致谢