大豆T-DNA插入突变体侧翼序列鉴定及GmPTIP基因的功能研究

目录

声明

第一章 前 言

1.1 我国大豆生产现状

1.2 大豆产量相关位点及基因的研究进展

1.2.1 关联分析检测发掘生物量及产量组分变异的SNP、QTL位点

1.2.2 调控大豆产量及生物量的相关基因

1.3 PTIP类基因的研究进展

1.4 TAIL-PCR研究概述

1.5 CRISPR/Cas9 介导的基因组定点编辑技术研究概述

1.6 农杆菌介导大豆遗传转化的研究概述

1.7 研究的目的和意义

第二章 大豆T-DNA插入突变体鉴定

2.1实验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 菌株和载体

2.1.3 实验仪器

2.1.4试剂

2.2实验方法

2.2.1 阳性T-DNA插入突变体植株检测

2.2.2 RT-PCR检测T-DNA插入拷贝数

2.2.3 TAIL-PCR扩增T-DNA侧翼序列

2.2.4 T-DNA插入突变体植株纯杂合鉴定

2.2.5 荧光定量PCR检测目的基因表达量

2.3 结果与分析

2.3.1 阳性T-DNA插入突变体植株检测结果

2.3.2 T-DNA插入突变体拷贝数分析

2.3.3 T-DNA插入位点的鉴定与PCR验证

2.3.4 T-DNA插入突变体植株纯杂合鉴定

2.3.5 插入位点相邻基因的表达水平检测

2.4 讨论

2.5 本章小结

第三章 GmPTIP基因的克隆及相关载体的构建

3.1 实验材料

3.1.1 植物材料

3.1.2 菌株和载体

3.1.3 试剂和培养基

3.1.4 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 GmPTIP基因克隆及过表达载体的构建

3.2.2 敲除载体的构建

3.2.3 亚细胞定位载体的构建

3.3 结果与分析

3.3.1 GmPTIP基因克隆和重组过表达载体的检测验证

3.3.2 重组敲除载体的检测验证

3.3.3 重组亚细胞定位载体的检测验证

3.4 讨论

3.5 本章小结

第四章 大豆GmPTIP过表达与敲除载体的遗传转化

4.1 实验材料

4.1.1 植物材料

4.1.2 菌株和载体

4.1.3 培养基

4.1.4 仪器与设备

4.2 实验方法

4.2.1 农杆菌介导的大豆遗传转化

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5本章小结

第五章 GmPTIP基因功能分析

5.1 实验材料

5.1.1 植物材料

5.1.2 仪器与设备

5.2 实验方法

5.2.1 PTIP类蛋白系统进化树的构建

5.2.2 GmPTIP 蛋白在烟草中的亚细胞定位

5.2.3 过表达和敲除转基因植株的检测与表型鉴定

5.3 结果与分析

5.3.1 PTIP类蛋白系统进化树分析

5.3.2 GmPTIP蛋白亚细胞定位结果

5.3.3 GmPTIP过表达转基因植株的检测与表型鉴定结果

5.3.4 GmPTIP敲除转基因植株的检测与表型鉴定结果

5.4 讨论

5.5 研究不足与展望

参考文献

致谢