PPARG通过负调控Six2影响肾透明细胞癌的增殖和凋亡

摘要

近来的研究已经表明PPARG在糖脂代谢中有着重要的作用，然而PPARG在不同的肿瘤进程中扮演着不同的角色。本文主要研究PPARG和它下游的靶基因在肾透明细胞癌中的角色。首先根据肾透明细胞癌的临床标本，我们发现了一些异常的临床指征和糖脂代谢指标，另外， PPARG是核受体家族却只在胞质中增加，而Six2却表现出了相反的结果。另外，在细胞水平上，我们证明了PPARG的激活能够促进细胞的凋亡，抑制细胞的增殖和迁移，减少Six2的表达。在进一步的研究中，我们发现过表达Six2能够减少Ecadherin的表达和细胞凋亡，而PPARG能够抵抗这种结果。这些结果表明 PPARG 能够促进凋亡和 Ecadherin的表达，抑制细胞的增殖和迁移。因此，本文为治疗肾透明细胞癌提供了新思路。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1实验材料

1.1生物信息学网站

1.2临床标本、实验细胞株、实验菌株和实验载体

1.3实验试剂与实验耗材

1.4 实验仪器与实验设备

2实验方法

2.1试剂配制

（1）液体培养基

（2）固体培养基

（3）磷酸盐缓冲液（PBS）

（4）1% SDS裂解液

（5）5x电泳缓冲液

（6）10x转膜液

（7）20xTBS缓冲液

（8）50×TAE 缓冲液

（9）5%封闭液

（10）3%抗体稀释液

（11）4%多聚甲醛

（12）5xPEG8000-NaCl

2.2载体构建

2.2.1引物设计

2.2.2 RNA提取

2.2.3 cDNA的合成

2.2.4 PCR反应

2.2.5琼脂糖凝胶电泳

2.2.6 DNA产物回收

2.2.7双酶切

2.2.8连接反应

2.2.9质粒转化

2.2.10菌落PCR

2.2.11小量提取质粒

2.2.12酶切鉴定

2.3细胞培养

2.3.1细胞复苏

2.3.2细胞传代

2.3.3细胞转染

2.3.4构建稳转细胞株

2.3.5免疫印迹（Western blot）实验

2.3.6免疫组化实验

2.3.7细胞增殖实验

2.3.8细胞凋亡实验

2.3.9细胞迁移实验

2.4统计学分析

3.实验结果

3.1肾透明细胞癌患者的临床特征和糖脂代谢特征

3.2生物信息学分析PPARG和Six2对肾透明细胞癌预后的影响

3.3 Six2在肾透明细胞癌组织切片中的蛋白表达量上升而PPARG表达量不明显

3.4 PPARG的激活抑制786-O和OS-RC-2细胞的迁移

3.5 PPARG的激活抑制786-O和OS-RC-2细胞的增殖

3.6 PPARG的激活促进786-O和OS-RC-2细胞的凋亡

3.7 PPARG的激活可抑制786-O和OS-RC-2细胞上皮间质的转化和Six2的表达

3.8 敲低PPARG可促进786-O和OS-RC-2细胞上皮间质的转化和抑制Six2的表达

3.9 PPARG抵抗Six2对Ecadherin的调控作用

3.10 PPARG通过抑制Six2影响肾透明细胞癌的细胞表型

4.讨论

参考文献

文献综述:肾透明细胞癌的研究现状

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果及发表的学术论文