GSK3β抑制剂对肾移植冷缺血再灌注损伤的保护作用

摘要

研究背景：肾脏移植是治疗终末期肾病患者最佳的替代疗法。在临床肾移植中，供体肾脏通常会经历热缺血与冷缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury, IRI）两个阶段，其中冷IRI严重影响肾移植后肾功能的恢复甚至加大了发生急性排斥反应的机率。糖原合成酶-3β（Glycogen Synthase Kinase-3β, GSK-3β）在肾小管上皮细胞的损伤和修复中有着不可或缺的作用。有研究表明在肝脏、心脏和脑缺血再灌注损伤中，抑制GSK-3β能显著降低核转录因子-κB（Nuclear factor-κB, NF-κB）的活化，减少炎症因子的释放并且减轻组织损伤。而GSK3β抑制剂的保护效应作用了肾移植IRI国内外尚未有报道，具体的机制也未明确。　　目的：分析GSK-3β抑制剂TDZD-8对大鼠肾移植IRI中NF-κB的活化、炎症反应和氧化应激的作用。　　方法：建立大鼠肾移植模型和冷IRI模型。每个模型随机分为4组：假手术组、肾移植组（冷IRI组）、TDZD-8（5mg/kg）组和TDZD-8 （1mg/kg）组，每组6只大鼠。采用Western-blot和IHC检测两个模型各组大鼠p-RelA/p65 ， p-GSK-3β， GSK-3β， RelA/p65变化；Elisa检测血清TNF-α、IL-1β、SOD和MDA的变化；HE染色观察肾脏的病理改变，作肾小管坏死评分；检测血清肌酐和尿素氮。　　结果：与假手术组相比，肾移植组和冷IRI组血清肌酐和尿素氮、血清TNF-α和IL-1β含量、肾小管坏死评分、免疫组化检测p-RelA/p65， p-GSK-3β表达、NF-κB p65的活性和血清MDA含量明显升高（P＜0.01）， GSK-3β活性和血清SOD含量明显降低（P＜0.01），病理损伤加重。用TDZD-8干预后，肾移植和冷IRI模型血清肌酐和尿素氮含量、肾小管坏死评分、血清TNF-α和IL-1β含量、免疫组化检测p-RelA/p65 ， p-GSK-3β的表达、NF-κB p65的活性和血清MDA含量降低（P＜0.05），而GSK-3β活性和血清SOD含量升高（P＜0.05），病理损伤减轻。　　结论：GSK-3β抑制剂能降低GSK-3β活性、下调NF-κB的磷酸化、减少下游炎症因子的释放、减轻肾脏病理和氧化应激损伤，减轻肾移植缺血再灌注损伤。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.2 主要实验器材

1.3 动物模型分组、建立及干预

1.3.1 肾移植模型的建立

1.3.2 冷IRI模型的建立

1.4 标本采集

1.5 肾脏病理学检查 (Hematoxylin and eosin染色, HE染色）

1.6 蛋白免疫印迹法（Westren-blot）检测

1.6.1 细胞总蛋白的提取

1.6.2 BCA法检测总蛋白和核蛋白的浓度

1.6.3 SDS-PAGE凝胶电泳

1.7 免疫组织化学法检测

1.8 ELISA检测血清炎症因子、SOD和MDA

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 TDZD-8对肾功能的影响

2.2 血清炎症因子的改变

2.3 病理改变（HE染色）和肾小管坏死评分

2.4 TDZD-8对GSK-3β的作用

2.5 TDZD-8对NF-κB p65的作用

2.6 SOD和MDA的改变

3 讨论

4 全文结论

参考文献

文献综述:TLR4/NF-κB信号通路在缺血再灌注损伤中的研究进展

致谢

攻读学位期间已发表的文章