缓冲液种类对尿酸酶脂质体影响的初步研究

摘要

尿酸酶(Uricase，URI)是生物体内嘌呤降解途径的重要酶。在人体内，若因嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄过程受阻，则会引起血液中尿酸的浓度显著升高，形成高尿酸血症，继而引发痛风综合征等一系列疾病。URI能降低血液中尿酸的浓度，故可用于治疗高尿酸血症，但URI具有稳定性差、活性半衰期短、易被酶降解及体内活性低等缺点。脂质体(Liposomes，LPs)是一种具有类脂双分子层，可将药物包封在双分子层中，形成超微型球状的载体制剂。它具有生物膜的相似性，能提高包封药物的稳定性，降低药物毒副作用和免疫原性，提高被包封药物的生物利用度，延长药物生物半衰期等优点，并具有一定的靶向和缓释作用。本文选取了4种不同的缓冲液制备了ULPs，并对ULPs的活性、稳定性、药效学和ULP2的药代动力学进行了初步研究。　　方法:　　1.采用逆向蒸发法制备ULPs。使用Tris-HCl缓冲液、Bicine-NaOH缓冲液、Tricine-NaOH缓冲液和Boric acid-Borax缓冲液分别制备ULP1、ULP2、ULP3和ULP4。　　2.采用葡聚糖凝胶柱法测定ULPs的包封率，使用马尔文粒度仪测定ULPs的粒径和Zeta电位。　　3.考察ULPs在体外的活性。测定游离URI和ULPs的最适温度、最适pH，以及两者在最适温度和最适pH条件下的活性大小。　　4.考察ULPs在体外的稳定性。通过对贮存稳定性、热稳定性、酸碱稳定性和抗胰蛋白酶水解能力进行测定，考察两者体外稳定性的情况。　　5.考察ULPs的药效学。建立高尿酸血症模型小鼠，通过测定小鼠体内的血尿酸水平，初步考察ULPs的药效学。　　6.考察ULP2的药代动力学特性。选用SD大鼠，通过测定大鼠血清中URI的活性，考察ULP2的体内药代动力学特性。　　结果:　　1.本实验成功制备了ULP1、ULP2、ULP3和ULP4，制得的制剂外观均匀，稳定性良好。　　2.ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的平均包封率分别为51.88％、56.45％、51.82％和54.19％，其中ULP2的包封率最高。ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的平均粒径分别为330.8 nm、280.5 nm、263.1 nm和265.7 nm，平均Zeta电位分别为-18.9mV、-19.0 mV、-14.3 mV和-29.0mV。　　3.游离URI的最适温度均为40℃;ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的最适温度分别为40℃、50℃、40℃和40℃。游离URI的最适pH均为8.5，其中URI2的活性最高;ULPs的最适pH均为8.0，其中ULP2的活性最高。体外活性测定结果表明ULPs的活性均高于游离URI，其中ULP2的活性最大。　　4.稳定性结果显示，ULPs的稳定性均明显高于游离URI。ULP2的贮存稳定性和抗胰蛋白酶水解能力是制剂中最稳定的。　　5.药效学测定结果显示ULPs较游离URI有更好的降体内血尿酸水平的作用，其中ULP2是制剂中降血尿酸水平最显著的。　　6.药代动力学实验结果表明，使用Bicine-NaOH缓冲液制备的ULP2能很好地改善游离URI的药代动力学特性，提高游离URI的生物利用度。　　结论:　　本实验制备的ULPs能提高游离URI在体外的活性、稳定性和降血尿酸水平的能力，不同的缓冲液种类对ULPs的体内外相关性质有影响，4种缓冲液中Bicine-NaOH缓冲液制备的ULP2在体外活性最高，贮存稳定性和抗胰蛋白酶水解能力最好，体内有显著的降血尿酸水平作用，ULP2药代动力学结果表明，ULP2提高了游离URI的生物利用度。

目录

声明

符号说明

摘要

前言

第一部分 ULPs的制备

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第二部分 ULPs活性的初步研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第三部分 ULPs稳定性的初步研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第四部分 ULPs药效学的初步研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第五部分 ULP2药代动力学的初步研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

全文总结

参考文献

文献综述 脂质体作为蛋白质和多肽类药物载体的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表文章情况