细胞外调节蛋白激酶在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用和机制

摘要

目的：应用细胞外调节蛋白激酶磷酸化特异性抑制剂PD98059研究ERK在雌激素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化、抑制细胞凋亡中的作用，探讨分子机制。 方法：以雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象，应用MTT法检测17β-E2对MCF细胞增殖影响，确定后续实验处理用浓度；MTT法检测PD98059对17β-E2促MCF-7细胞增殖作用的影响，求取其中效抑制浓度；流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡情况；TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性，Western blot检测p-ERK1/2、野生型P53、PCAF蛋白水平；RT-PCR检测野生型p53mRNA、PCAFmRNA水平。 结果：ERK磷酸化抑制剂PD98059能抑制17β-E2对MCF-7细胞的促增殖作用，具有时效.量效关系，其差异具有显著统计学意义（P<0.01），各作用时间点PD98059中效抑制浓度分别为：89.28μmol/L·24h、39.81μmol/L·48h、21.87μmol/L·72h。应用20μmol/L的PD9805948 h后，能抑制17β-E2促进MCF-7细胞周期转化作用，使G1期细胞增加，S期和G2期细胞减少（P<0.05）；抑制17β-E2对MCF-7细胞凋亡的抑制作用，使细胞早期凋亡率增加（P<0.05）；阻抑17β-E2增强MCF-7细胞端粒酶活性的作用（P<0.05）；增强野生型P53蛋白表达和p53基因转录水平（P<0.05）；抑制PCAF蛋白水平表达（P<0.05），PCAFmRNA转录水平差异无统计学意义（P>0.05）；P-ERK1/2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论：ERK在17β-E2促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化，抑制凋亡中具有重要的作用，其机制与下调MCF-7细胞野生型p53转录和增强MCF-7细胞的端粒酶活性有关，并与其促进MCF-7细胞辅激活因子PCAF蛋白表达，增强雌激素受体信号有关。

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讨论

结论

参考文献

照 片

文献综述：雌激素对乳腺癌细胞的作用及其信号转导机制

致 谢

攻读硕士学位期间所发表的论文