低分子肝素对人胰腺细胞株A549增殖及血管内皮生长因子、转化生长因子β1表达的影响

摘要

目的:通过使用低分子肝素干预人肺腺癌细胞株A549，检测使用药物干预后对其增殖的抑制情况以及对细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况的影响，探讨低分子肝素对人肺腺癌细胞株A549的增殖是否存在抑制作用及其可能机制。　　方法:(1)将体外培养的人肺腺癌A549细胞取对数生长期细胞分为未加入低分子肝素组（对照组），低分子肝素干预组（浓度分别为0.5ug/ml、1.0 ug/ml、2.0 ug/ml、5.0 ug/ml、10.0 ug/ml）共6组，用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）分别检测各组于24小时、48小时、72小时的吸光度值，并计算出各组的增殖抑制率，将对照组与实验组及实验组之间的数据进行比较。(2)选取低分子肝素对人肺腺癌A549细胞最佳抑制作用时间72h，于该时间提取并离心细胞上清液，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组人肺腺癌A549细胞上清液中VEGF及TGF-β1的含量，对各个组之间VEGF、TGF-β1进行比较，并做VEGF、TGF-β1相关性分析。　　结果:(1)低分子肝素干预24h时对照组IOD值为0.719±0.033，各实验组IOD值分别为0.671±0.041，0.632±0.049，0.604±0.017，0.588±0.072，0.569±0.035;细胞抑制率分别为6.67％，12.10％，15.99％，18.22％，20.86％，对照组与各实验组IOD值比较差异无统计学意义(P＞0.05)。(2)低分子肝素干预48h时对照组IOD值为0.889±0.065，各实验组IOD值分别为0.711±0.044,0.630±0.057,0.586±0.091,0.514±0.039,0.471±0.024;细胞抑制率分别为20.02％，29.13％，34.08％，42.18％，47.02％，对照组与各实验组及各实验组组间IOD值比较差异有统计学意义(P＜0.05)。(3)低分子肝素干预72h时对照组IOD值为1.104±0.092，各实验组IOD值分别为0.816±0.027，0.708±0.042，0.635±0.028，0.542±0.071，0.450±0.036;细胞抑制率分别为26.09％，35.87％，42.48％，50.91％，59.23％，对照组与各实验组及各实验组组间IOD值比较差异有统计学意义(P＜0.05)。(4)用酶联免疫吸附法(ELISA)检测72h时各组腺癌A549细胞上清液中VEGF及TGF-β1的含量，结果显示，各实验组与对照组比较A549细胞VEGF及TGF-β1的表达均下降，且差异具有统计学意义(P＜0.05)。将VEGF及TGF-β1进行相关性分析，其相关系数为0.934，二者具有显著正相关性(P＜0.01)。　　结论:(1)低分子肝素抑制人肺腺癌A549细胞的增殖与低分子肝素浓度有关，抑制率随低分子肝素浓度增加而增加，具有浓度依赖性，且与干预时间有关。(2)低分子肝素抑制肺腺癌A549细胞的机制可能与下调肺癌细胞VEGF及TGF-β1的表达有关。(3)VEGF及TGF-31在肺癌发生发展过程中可能起协同作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验标本

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 主要实验试剂配制

5 主要实验步骤

6 统计分析

结果

1．MTT法检测低分子肝素对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

2．酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中VEGF的含量

3．酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1的含量

4．人肺腺癌A549细胞表达VEGF与TGF-β1的浓度的相关性分析

讨论

1．低分子肝素的抗肿瘤作用

2．血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤发生发展中的作用

3．转化生长因子β1(TGF-β1)在肿瘤发生发展中的作用

4．VEGF与TGF-β1在肿瘤发生发展中的协同作用

结论

参考文献

中英文缩略词对照表

致谢

综述 TGF-β1在非小细胞肺癌中的研究进展

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