检测牛病毒性腹泻病毒血清抗体间接ELISA的建立与应用

目录

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主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 牛病毒性腹泻病毒的概况

1.1.1 基因分类及遗传多样性

1.1.2 病毒的基因组及编码的蛋白

1.2 BVDV的传染源、传播途径及宿主

1.3 国内外流行情况

1.4检测

1.4.1 BVDV特异性抗体检测

1.4.2抗原/病毒检测

1.5 BVDV感染的防控

1.6 研究目的及意义

第二章 以BVDV的重组P80蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法的建立及应用

2.1 材料与方法

2.1.1 病毒、质粒和菌种

2.1.2 主要试剂

2.1.3 血清样品

2.1.4纯化蛋白有关溶液

2.1.5 重组蛋白P80的原核表达和鉴定

2.1.6 P80重组蛋白的纯化

2.1.7 P80重组蛋白的复性

2.1.8 以P80蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法建立

2.1.9 包被条件的确定

2.1.10 最佳封闭液和封闭时间的确定

2.1.11 血清最佳孵育时间的确定

2.1.12 二抗最佳稀释比例的确定

2.1.13 二抗最佳孵育时间的确定

2.1.14 显色液的最佳显色时间的确定

2.1.15 临界值的确定

2.2.16 特异性试验

2.1.17 敏感性试验

2.1.18 重复性试验

2.1.19 与病毒中和试验的符合率试验

2.1.20 牛血清样品的检测

2.2 结果

2.2.1 重组P80蛋白的原核表达鉴定及纯化

2.2.2 方阵滴定

2.2.3 包被条件的优化

2.2.4 封闭条件的优化

2.2.5 血清的最佳作用时间

2.2.6 二抗最佳稀释比例的确定

2.2.7 二抗最佳孵育时间的确定

2.2.8 显色液的最佳显色时间的确定

2.2.9 临界值的确定

2.2.10 特异性试验结果

2.2.11 敏感性试验

2.2.12 重复性试验结果

2.2.13 与病毒中和试验的符合率

2.2.14 建立的间接ELISA方法的初步应用

2.3 讨论

第三章 以BVDV的重组E2蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法的建立及应用

3.1 材料与方法

3.1.1 病毒、质粒和菌种

3.1.2 主要试剂

3.1.3 血清样品

3.1.4 纯化蛋白有关溶液

3.1.5 原核表达和鉴定重组蛋白E2

3.1.6 E2重组蛋白的纯化

3.1.7 E2重组蛋白的复性

3.1.8 以E2蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法建立

3.1.9 包被条件的确定

3.1.10 封闭液和封闭时间的确定

3.1.11 血清最佳孵育时间的确定

3.1.12 二抗最佳稀释比例的确定

3.1.13 确定二抗最佳孵育时间

3.1.14 最佳显色时间的确定

3.1.15 临界值的确定

3.1.16 特异性试验

3.1.17 敏感性试验

3.1.18 重复性试验

3.1.19 与病毒中和试验的符合率试验

3.1.20 牛血清样品的检测

3.2 结果

3.2.1 重组E2蛋白的原核表达鉴定及纯化

3.2.2 方阵滴定

3.2.3 优化包被条件

3.2.4 封闭条件的优化

3.2.5 血清的最佳作用时间

3.2.6 二抗最佳稀释比例的确定

3.2.7 二抗最佳孵育时间的确定

3.2.8 显色液的最佳显色时间的确定

3.2.9 临界值的确定

3.2.10 特异性试验结果

3.2.11 敏感性试验结果

3.2.12 重复性试验结果

3.2.13 与病毒中和试验的符合率

3.2.14 牛血清现地样品的检测结果

3.3 讨论

第四章 以BVDV的重组E0蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法的建立及应用

4.1 材料与方法

4.1.1 病毒、质粒和菌种

4.1.2 主要试剂

4.1.3 血清样品

4.1.4 纯化蛋白有关溶液

4.1.5 重组蛋白E0的原核表达和鉴定

4.1.6 E0重组蛋白的纯化

4.1.7 E0重组蛋白的复性

4.1.8 以E0蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法建立

4.1.9 包被条件的确定

4.1.10 最佳封闭液和封闭时间的确定

4.1.11 血清最佳孵育时间的确定

4.1.12 二抗最佳稀释比例的确定

4.1.13 确定二抗最佳孵育时间

4.1.14 显色液的最佳显色时间的确定

4.1.15 临界值的确定

4.1.16 特异性试验

4.1.17 敏感性试验

4.1.18 重复性试验

4.1.19 与病毒中和试验的符合率试验

4.1.20 牛血清样品的检测

4.2 结果

4.2.1 重组E0蛋白的原核表达鉴定及纯化

4.2.2 方阵滴定

4.2.3 优化包被条件

4.2.4 封闭条件的优化

4.2.5 血清的最佳作用时间

4.2.6 二抗最佳稀释比例的确定

4.2.7 确定二抗的最佳孵育时间

4.2.8 显色液的最佳显色时间的确定

4.2.9 临界值的确定

4.2.10 特异性试验结果

4.2.11 敏感性试验结果

4.2.12 重复性试验结果

4.2.13 与病毒中和试验的符合率

4.2.14 牛血清现地样品的检测结果

4.3 讨论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历