基于重组Ems蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

摘要

为建立中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体间接ELISA方法,本研究对新疆地区多个发病牛场临床发病牛肛拭子提取总RNA,RT-PCR扩增BVDV-Ems基因截短片段(681 bp),将该片段克隆于表达载体中,经大肠杆菌表达并纯化后作为ELISA包被抗原,建立了间接ELISA检测方法.特异性试验显示该方法与牛其它常见5种病原阳性血清均无交叉反应.敏感性试验显示在阳性血清1∶1 600倍稀释时仍能够检出.重复性试验显示批内、批间变异系数均小于10％.与爱德士(IDEXX)商品化试剂盒相比较,总符合率较高.应用该方法对新疆地区2个散户牛场和3个规模化牛场的564份牛血清样品进行了检测,结果显示BVDV抗体阳性率分别为11.76％、13.04％、82.76％、77.96％、75.82％,表明BVDV感染在新疆部分地区已呈高发态势.该方法的建立对新疆地区BVDV的血清流行病学调查和养牛业的健康发展具有重要意义.