声明
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 茄科糖酯的相关研究
1.1.1 糖酯的功能特性
1.1.2 糖酯的主要结构类型
1.1.3 糖酯合成代谢机制
1.2 乙酰乳酸合酶相关研究进展
1.2.1 乙酰乳酸合酶的发现
1.2.2 高等植物中的乙酰乳酸合酶
1.3 基因功能鉴定方法
1.3.1 生物信息学分析
1.3.2 转基因技术
1.3.3 表达模式分析
1.3.4 基因编辑技术
1.4 本研究切入点与技术路线
1.4.1 切入点
1.4.2 技术路线
第二章 NtALS候选基因的挖掘
2.1 材料与试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 载体和菌种
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器
2.1.5 数据分析
2.2 实验方法
2.2.1 候选基因的筛选与系统进化树的构建
2.2.2 引物设计
2.2.3 qRT-PCR方法
2.2.4 基因克隆方法
2.3 结果与分析
2.3.1 普通烟草中ALS候选基因的筛选
2.3.2 NtALSs的系统进化树分析
2.3.3 NtALS1的克隆与遗传来源分析
2.4 讨论
第三章 NtALS1的组织定位分析
3.1 材料与试剂
3.1.1 实验材料
3.1.2 载体和菌种
3.1.3 实验试剂
3.1.4 实验仪器
3.1.5 数据分析
3.2 实验方法
3.2.1 引物设计
3.2.2 NtALS1启动子的克隆
3.2.3 组织定位表达载体的构建
3.2.4 激光共聚焦观察
3.3 结果与分析
3.3.1 启动子的克隆
3.3.2 构建组织定位载体
3.3.3 瞬时表达结果
3.4 讨论
第四章 NtALS1的亚细胞定位分析
4.1 材料与试剂
4.1.1 实验材料
4.1.2 载体和菌种
4.1.3 实验试剂
4.1.4 实验仪器
4.1.5 数据分析
4.2 实验方法
4.2.1 亚细胞定位的预测
4.2.2 引物设计
4.2.3 亚细胞定位载体的构建
4.2.4 激光共聚焦观察
4.3 结果与分析
4.3.1 NtALS1亚细胞定位的预测
4.3.2 制备p2#4线性载体
4.3.3 亚细胞定位载体构建
4.3.4 瞬时表达结果
4.4 讨论
第五章 NtALS1的基因敲除分析
5.1 材料与试剂
5.1.1 实验材料
5.1.2 载体和菌种
5.1.3 实验试剂
5.1.4 实验仪器
5.1.5 数据分析
5.2 实验方法
5.2.1 靶标序列的设计
5.2.2 构建中间载体
5.2.3 构建三元靶标重组载体
5.2.4 遗传转化与组织培养
5.2.5 突变体鉴定
5.2.6 鲜烟叶表面糖酯检测
5.3 结果与分析
5.3.1 Crispr Cas9载体构建及遗传转化
5.3.2 T0代突变体的分子检测
5.3.3 T1代纯合突变体的分子检测
5.3.4 T1代纯合突变体糖酯表型的鉴定
5.4 讨论
第六章 全文结论
参考文献
附录A
致 谢
作者简历
中国农业科学院;
