表达新城疫病毒F蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建及免疫原性初步评价

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摘要

英文缩略表

第一章 绪 论

1.1鸡马立克氏病病毒

1.1.1火鸡疱疹病毒

1.1.2 鸡马立克氏病病毒活载体疫苗研究进展

1.2 新城疫概述

1.2.1新城疫病毒

1.2.2新城疫病毒流行病学

1.2.3新城疫疫苗研究进展

1.3本研究的目的意义

第二章 HVT Fosmid粘粒拯救系统的建立

2.1材料

2.1.1疫苗株

2.1.2鸡胚和细胞

2.1.3 主要试剂和实验仪器

2.2方法

2.2.1 HVT扩大培养及基因组提取

2.2.2基因组DNA平末端化修饰

2.2.3 连接和包装

2.2.4 重组粘粒的鉴定和测序

2.2.5亲本株病毒的拯救

2.2.6 拯救亲本株病毒的鉴定

2.3结果

2.3.1 HVT基因组Fosmid文库的构建

2.3.2用于病毒拯救的重组粘粒的选择

2.3.3 拯救病毒rHVT的鉴定

2.4 讨论

第三章 rHVT-NDV-F疫苗株的构建及鉴定

3.1材料

3.1.1鸡胚和细胞

3.1.2 疫苗株和质粒

3.1.3 主要试剂和实验仪器

3.2 实验方法

3.2.1 HVT粘粒拯救系统的改造

3.2.2表达NDV F基因重组粘粒的构建

3.2.3表达NDV F基因重组HVT疫苗株的构建

3.2.4 rHVT-NDV-F疫苗株PCR鉴定

3.2.5 rHVT-NDV-F疫苗株目的蛋白表达鉴定

3.2.6 rHVT-NDV-F疫苗株体外复制能力检测

3.2.7 重组病毒的遗传稳定性鉴定

3.3 实验结果

3.3.1 H4-Kan/ccdb粘粒构建鉴定

3.3.2 H4-F粘粒的构建鉴定

3.3.3 rHVT-NDV-F重组病毒的拯救

3.3.4 rHVT-NDV-F重组病毒PCR鉴定

3.3.5 rHVT-NDV-F重组病毒的蛋白表达鉴定

3.3.6 重组病毒的体外复制动力学鉴定

3.3.7 重组病毒的遗传稳定性鉴定

3.4讨论

第四章 rHVT-NDV-F重组病毒的免疫保护效力初步评价

4.1 材料

4.1.1疫苗株和病毒

4.1.2 细胞和雏鸡

4.1.3 主要实验试剂和仪器

4.2 实验方法

4.2.1 rHVT-NDV-F重组病毒动物实验分组

4.2.2 rHVT-NDV-F重组病毒诱导ELISA抗体水平检测

4.2.3 动物实验攻毒发病情况和排毒检测实验测

4.3 实验结果

4.3.1免疫rHVT-NDV-F重组病毒鸡产生抗体水平

4.3.2 rHVT-NDV-F重组病毒NDV强毒F48E9株的免疫保护效力评价

4.3.3 rHVT-NDV-F重组病毒NDV流行株LHLJ/01/06株的免疫保护效力评价

3.4 讨论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历